Active Arf1 Pull-Down and Detection Kit

Thermo Scientific Pierce活性型Arf1プルダウンおよび検出キットは、GGA3タンパク質結合ドメインとの特異的なタンパク質相互作用により、GTP結合Arf1 GTPaseの選択的濃縮と検出を可能にするキット一式です。

活性型Arf1プルダウンおよび検出キットには、精製したGST-GGA3タンパク質結合ドメイン（PBD）、グルタチオンアガロースレジン、ポジティブコントロールおよびネガティブコントロール（それぞれGTPγSおよびGDP）、溶解／結合／洗浄バッファー、抗Arf1一次抗体、サンプルバッファー、スピンカラム、および収集チューブが含まれます。このキットは、堅牢なArf1活性を持つことが知られている細胞株、MDCK細胞のライセートを使用して検証されています。

活性型Arf1プルダウンおよび検出キットの特長：

•高感度かつ高精度 — 最適化された試薬、特異的抗Arf1抗体、およびウェスタンブロット法により、正確なコントロールと定量結果を保証
• 検証済み — 検査済みのArf1検出機能で品質と性能を保証
• 適合性 — マウス、ラット、およびヒト由来のさまざまな細胞タイプに対応

アプリケーション：
• 細胞の分化、移動、分裂、細胞骨格の再配列中のArf1 GTPaseの活性化の追跡
• コートタンパク質が発芽小胞またはトランスゴルジネットワークおよびエンドソームに集合する際のArf1の活性化の研究
• 増殖因子による刺激後のArf1活性のモニタリング
• 小分子阻害剤治療後のArf1活性のモニタリング

活性型Arf1プルダウンおよび検出キットは、GTPγSで処理した細胞溶解物を使用して内因性Arf1を活性化し、GDP処理ライセートと比較して低分子量GTPaseを不活性化することにより、活性型Arf1濃縮方法の機能と特異性を検証しています。GTPγS処理は、GTP結合型（活性）でArf1をトラップし、内在性Arf1が存在する場合に強いシグナルを発生させます。GDP処理はArf1をGDP結合状態（非活性）に押し上げるため、Arf1のタンパク質レベルに関係なくシグナルが最小限になるか、または全く得られません。キットは、HRP標識二次抗体（ヤギ抗ウサギIgG、製品番号31460）およびThermo Scientific SuperSignal West Pico化学発光基質（製品番号34080）を用いたウェスタンブロット検出用に最適化されています。キットには、30回のプルダウンアッセイに十分なコンポーネントが含まれています。

Arf1バックグラウンド：
ADPリボシル化因子タンパク質1～6（Arfs）は、低分子量GTPaseのRasファミリーのメンバーです。Arf1～6の細胞は他のArfファミリーメンバーと構造的に似ていますが、役割は異なります。その内因性の役割は、ADPリボシル化ではなく、ヘテロ三量体Gタンパク質の調節です。Arfタンパク質は、次の3つのクラスに分類できます。クラスI — Arf1～3、クラスII — Arf4、Arf5、クラスIII — Arf6。クラスIおよびIIのArfはトランスゴルジネットワーク（TGN）に関連しており、ゴルジ膜へのエフェクタータンパク質の補充や小胞形成に関与しています。他のGTPaseとは異なり、Arf GTPaseはアミノ末端のミリストイル化によって修飾され、膜への挿入が可能です。クラスIIIのタンパク質Arf6 は血漿膜に関連し、血漿膜での小胞形成、小胞のリサイクル、アクチン細胞骨格の再構築に関与します。

Arf GTPaseはすべての細胞で発現していますが、Arf1が最も多く存在し、高活性で、最もよく特性が明らかになっています。Arf1は、コートマーおよびクラスリンアダプター複合体（AP）などのエフェクターをゴルジ体にリクルートし、小胞形成および出芽を起こします。リクルートの後、Arf1は小胞が形成されるまでコートタンパク質を膜に保持します。続いてArf1はエフェクターと相互に作用し、その結果Arf1が膜から遊離し小胞出芽が起こります。Golgi-localized γ-ear-containing Arf （GGA）エフェクター結合タンパク質は、アミノ末端VHSドメイン、GGAホモロジードメイン（GGAH）、プロリンリッチリンカー領域、およびcarboxy-terminal γ-ear adaptin homology domain（AGEH）を持ちます。VHSドメインは細胞質ドメインと相互作用して受容体を選別し、GGAHドメインは活性化されたArfと結合し、プロリンリッチ領域はクラスリンと相互作用し、AGEHドメインはサイトゾルタンパク質と相互作用します。GGAHドメインは、変異研究を通じてGTP結合Arfに十分に結合し、Arf1は3つのGGAエフェクタータンパク質すべてに結合することが示されています。GGAタンパク質とTGNおよび細胞膜との関連は、Arfによって調節されます。

詳細な製品データ
• 特定の下流エフェクターを介した低分子量GTPaseの活性化の測定