Pierce™ Gaussia Luciferase Flash Assay Kit
Pierce™ Gaussia Luciferase Flash Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Gaussia Luciferase Flash Assay Kit

Thermo Scientific Pierce Gaussia Luciferase Flash Assay Kitを使用して、哺乳類細胞の培養培地および全細胞ライセート中の調節因子の転写活性を超高感度でアッセイできます。Gaussia詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
16158100反応キット
161591000反応キット
製品番号(カタログ番号) 16158
価格(JPY)
20,700
Each
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数量:
100反応キット
Thermo Scientific Pierce Gaussia Luciferase Flash Assay Kitを使用して、哺乳類細胞の培養培地および全細胞ライセート中の調節因子の転写活性を超高感度でアッセイできます。

Gaussia Luciferase Flash Assay Kitの特長:

高感度—感度が1,000倍の高いため、必要な細胞は少量
高いコスト効率—アッセイの感度が非常に高いため、試薬の使用量が低減
分泌型ルシフェラーゼ—細胞を破壊することなく、リアルタイムアッセイおよびカイネティック解析が可能
時間を節約—節約分泌型ルシフェラーゼを用いたアッセイでは、サンプル処理時間を最小限に短縮
自動化対応—ハイスループットスクリーニングに適合
便利—汎用の細胞溶解バッファーと最適化済みフラッシュアッセイ試薬を同梱
安全—非放射性アッセイを実現

このFlash Assay Kitには、哺乳類細胞の培養培地およびライセート中のガウシアルシフェラーゼ活性を測定するための試薬が含まれます。このキットをThermo Scientific Gaussia Luc Vectorsと併用すると、プロモーターまたは経路活性の分泌検出または細胞内検出を行うための、非常に高感度な生物発光レポーターアッセイ系を確立できます。ガウシアルシフェラーゼが細胞培養培地に高濃度で分泌されるため、生細胞のレポーター活性モニタリングを可能にします。ガウシアは、ホタルまたはウミシイタケルシフェラーゼと比較して、同様の条件下で著しく強いシグナルを生成します。

内容:
細胞溶解バッファー、反応バッファー、および基質

必要なもの:
ガウシアルシフェラーゼ、およびルミノメーター、または発光モニタリングが可能な他の機器(Thermo Scientific Luminoskan AscentやVarioskan Flashマイクロプレートリーダーなど)

アプリケーション:
cis調節因子およびtrans作用因子を解析するためのプロモーター研究
• 薬物スクリーニング
• siRNAおよびmiRNAのスクリーニング
• オフターゲット効果を研究するマルチプレックスアッセイ
• 分泌経路/タンパク質局在レポーターアッセイ
• シグナル伝達経路解析
• RNAスプライシング研究

ガウシアルシフェラーゼは、海生カイアシ類であるGaussia princepsに由来する20 kDaのタンパク質です。この生物発光酵素が細胞培養培地に高濃度で分泌されるため、生細胞のレポーター活性モニタリングを可能にします。ルシフェラーゼ反応で生成された発光シグナルは、産生されたガウシアルシフェラーゼタンパク質量と相関し、ガウシア遺伝子発現を誘導するプロモーター活性の測定に用いることができます。ガウシアルシフェラーゼが生成したたシグナルは強い発光カイネティクスを示し、ホタルまたはウミシイタケルシフェラーゼと比較して、同様の条件下で著しく強いシグナルを生成しまし。このアッセイキットは、当社のGaussia Luc Vectors用に最適化されていますが、セレンテラジンを基質として使用する他のガウシアルシフェラーゼおよび誘導体とも十分な互換性があります。(グローアッセイには、当社のGaussia-Dura Luc Vectorsをご利用ください。)

その他の製品データ
高感度マルチプレックスルシフェラーゼレポーターアッセイ
トランスフェクションが困難なJurkat細胞のルシフェラーゼアッセイ
多重ルシフェラーゼレポーターを用いた神経分化のモニタリング
農薬化学物質による抗酸化反応経路の活性化
多用途性ルシフェラーゼ:マイクロプレート発光計およびフラッシュルシフェラーゼアッセイ
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
アッセイレポーター酵素、ルシフェラーゼレポーターアッセイ
適合する細胞哺乳類細胞
検出法バイオ発光
使用対象 (装置)ルミノメーター(マイクロプレート)
フォーマット384ウェルプレート、96ウェルプレート
標識タイプ酵素標識
製品ラインPierce
数量100反応キット
基質セレンテラジン
基質特性化学基質
基質タイプルシフェラーゼ基質
対応可能対象100 Luciferase Assays
ターゲットルシフェラーゼ、ガウシアルシフェラーゼ
技術高度化学発光性
タイプアッセイキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
対応範囲:マイクロプレートウェルでのルシフェラーゼアッセイ100回
• ガウシアフラッシュアッセイバッファー、5 mL(4℃保存)
• 100Xセレンテラジン、50 µL(-80℃保存)°
• Luciferase Cell Lysis Buffer (2X)、6 mL(室温保存)

キットは-80℃で保存、または各試薬を個別に指定温度で保存。

よくあるご質問(FAQ)

I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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I am getting a high saturating signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What could have happened?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: for secreted Gaussia/Cypridina Luciferase, dilute the sample using media from the cell culture; for cell lysate, dilute the sample using lysis buffer 


  • Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.

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    Why am I getting a low signal in lysate using a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay? Can you provide some suggestions?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-optimized lysis buffer used: Assay luciferase activity in the media to confirm good expression of luciferase; Use only the provided lysis buffer.
    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I got a low signal in media when I used a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What happened?

    Here are possible causes and solutions:

    - Insufficient luciferase accumulation in media: Incubate cells for a longer time.
    - Low luciferase expression: Use less media per well during the experiment;.Use a different promoter or growth conditions to improve expression;.Increase the integration time on the instrument;.Scale-up the volume of sample and reagent per well.
    - Treatment interfered with cellular secretory pathway: Transfect cells with a plasmid for constitutive expression of Luciferase (i.e., with pTK or pCMV promoter); Determine if luciferase actively expresses in media without treatment. Add treatment; Determine if there is a corresponding drop in luciferase activity from the constitutively expressed plasmid.

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    I am getting no signal with my Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality - use only transfection grade DNA; Use actively dividing, low passage cells; Use a different cell type.
    - No or low promoter activity: Use conditions known for promoter activation; Incubate cells for a longer time; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C; maintain 100X Vargulin at -80 degrees C; Prepare new Coelenterazine Working Solution if used longer than 8 hours; Prepare new Vargulin Working Solution if used longer than 2 hours

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