Pierce™ Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
Pierce™ Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

Thermo Scientific Pierce Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、哺乳類の全細胞ライセート中の細胞内のウミホタルおよび赤色発光ホタルルシフェラーゼ活性を同時検出するために必要な試薬を提供します。Cypridina-Firefly詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
16183
または、製品番号EKT88
100反応キット
製品番号(カタログ番号) 16183
または、製品番号EKT88
価格(JPY)
29,600
Each
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数量:
100反応キット
Thermo Scientific Pierce Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、哺乳類の全細胞ライセート中の細胞内のウミホタルおよび赤色発光ホタルルシフェラーゼ活性を同時検出するために必要な試薬を提供します。

Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kitの特長:

同時検出—フィルターを使用して波長を分離することで、2つのルシフェラーゼ活性を同時検出
高感度—鮮やかな青色のウミホタルと、赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性を同一サンプル内で測定可能
迅速—従来の連続デュアルアッセイとは異なり、消光ステップは不要
マルチプレックス—同一サンプル内で2つの細胞活性を定量可能

Pierce Cypridina-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、ウミホタルと赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性の同時検出を可能にする高感度アッセイです。ウミホタルルシフェラーゼは実験レポーターとして機能し、構造的に活性化された赤色発光ホタルは標準化コントロールとして機能します。以下の動画が示すように、レポーターとコントロールを組み合わせることで、基質試薬の添加または消光を2段階で行うことなく、実験レポーターとコントロールのルシフェラーゼ活性を1回の読み取りアッセイで同時にモニタリングできます。アッセイの反応液は両方のルシフェラーゼに対応した基質を含み、フラッシュタイプのカイネティクスによって反応は同時に起こります。その結果としての発光シグナルは、フィルターを使用してスペクトル分解できます。1つのサンプルから、調節因子の転写活性、シグナル伝達経路、および活性化因子または阻害因子の効果をアッセイできます。

内容:
細細胞溶解バッファー、反応バッファー、Vargulin基質およびD-ルシフェリン基質

必要なもの:
ウミホタルおよび赤色発光ホタルルシフェラーゼレポーター、ウミホタルルシフェラーゼ用のフィルター(425~525 nm)と、赤色ホタルルシフェラーゼ用のフィルター(615~675 nm)のセット;ルミノメーター、または発光モニタリングが可能な他の機器(Thermo Scientific Luminoskan AscentやVarioskan Flashマイクロプレートリーダーなど);25ウェル以上を同時測定する場合はインジェクターが必要。

アプリケーション:
• 2つの調節因子の同時解析
• 2つのシグナル伝達経路の同時モニター
• 1回のスクリーニングで複数ターゲットを解析(オフターゲット効果など)

アプリケーションビデオ:
ウミホタルルシフェラーゼは、ホタルや天然のウミシイタケルシフェラーゼより明るい生物発光シグナルを放出します。ウミホタルルシフェラーゼが生成する生物発光シグナル(λmax = 463 nm)は、Vargulinの酸化によって生じます。この反応には、アデノシン三リン酸(ATP)や他の補因子は必要ありません。赤色発光ホタルルシフェラーゼは、Luciola cruciata由来の日本ゲンジボタルルシフェラーゼの変異型です。このルシフェラーゼは、ATPの存在下でD-ルシフェリンの酸化から生じる、赤色帯域にシフトした発光スペクトル(λmax = 613 nm)を生成します。赤色発光ホタルおよびウミホタルルシフェラーゼは、シグナルのスペクトル分解が可能なため、デュアルアッセイで使用できます。

その他の製品データ
高感度マルチプレックスルシフェラーゼレポーターアッセイ
ルシフェラーゼレポーターアッセイの同時デュアル発光検出
多重ルシフェラーゼレポーターを用いた神経分化のモニタリング
農薬化学物質による抗酸化反応経路の活性化
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
アッセイレポーター酵素、ルシフェラーゼレポーターアッセイ
適合する細胞哺乳類細胞
検出法バイオ発光
使用対象 (装置)ルミノメーター(マイクロプレート)
フォーマット384ウェルプレート、96ウェルプレート
標識タイプ酵素標識
製品ラインPierce
数量100反応キット
基質Vargulin(ウミホタルルシフェリン)、D-ルシフェリン
基質特性化学基質
基質タイプルシフェラーゼ基質
対応可能対象100 Dual Luciferase Assays
ターゲットルシフェラーゼ、ウミホタルルシフェラーゼ
技術高度化学発光性
タイプアッセイキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
対応範囲:マイクロプレートウェルでのデュアル-ルシフェラーゼアッセイ100回
• Cypridina-Firefly Dual Assayバッファー、5 mL(4℃保存)
• 100X Vargulin、50 µL(-20℃保存)
• D-ルシフェリン、3 mg(4℃保存)
• Luciferase Cell Lysis Buffer (2X)、6 mL、(室温保存)

キットを受け取り後-20℃で保存、または各コンポーネントを個別に指定温度で保存。

よくあるご質問(FAQ)

I got a high background signal when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla -Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use a new sample; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Change pipette tips after each well; Reduce shaker speed during the cell lysis step to avoid contaminating the wells.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

I got a high signal when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla -Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: 
    Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.



  • Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

    I got a low signal in my lysate when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla-Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low luciferase expression: Lyse cells in smaller volume of 1X Cell Lysis Buffer; Use a different promoter or growth conditions to improve expression; Increase the integration time on the instrument; Scale up volume of sample and reagent per well.

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    I did not get any signal when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla-Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

    Here are possible causes and solutions:

    - Low transfection efficiency: Optimize transfection conditions using a visual transfection control (e.g., a plasmid over-expressing a fluorescent protein); Verify plasmid DNA quality using restriction digestion and agarose gel electrophoresis; Use only transfection grade DNA - please note that most high-quality plasmid DNA should be supercoiled; Use actively dividing, low-passage cells; Use a different cell type.
    - No promoter induction: Incubate cells using promoter-specific inducing conditions; Incubate cells for a longer time after treatment; Change growth conditions to improve expression; Use a different promoter.
    - Substrate auto-oxidized: Protect substrate from light and air; Maintain 100X Coelenterazine at -80 degrees C, 100X Vargulin at -20 degrees C, and 100X D-Luciferin at -20 degrees C.

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    I got a high background signal with a Gaussia/Cypridina/Renilla Luciferase Glow/Luciferase Flash assay. What went wrong?

    Here are possible causes and solutions:

    - Non-specific oxidation of substrate: Use less serum in the cell culture media; Note: Albumin can increase the auto-oxidation of Vargulin; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
    - Control sample is contaminated: Use new sample; Change pipette tips after each well.

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