Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit

Thermo Scientific Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、哺乳類の全細胞ライセート中の細胞内のウミシイタケおよび赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性を同時検出するために必要な試薬を提供します。Renilla-Firefly詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
16185100反応キット
161861000反応キット
製品番号(カタログ番号) 16185
価格(JPY)
39,100
Each
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数量:
100反応キット
Thermo Scientific Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、哺乳類の全細胞ライセート中の細胞内のウミシイタケおよび赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性を同時検出するために必要な試薬を提供します。

Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kitの特長:

同時検出—フィルターを使用して波長を分離することで、2つのルシフェラーゼ活性を同時検出
高感度—緑色発光ウミシイタケと赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性を同一サンプル内で測定可能
迅速—従来の連続デュアルアッセイとは異なり、消光ステップは不要
マルチプレックス—同一サンプル内で2つの細胞活性を定量可能

Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kitは、緑色発光ウミシイタケと赤色発光ホタルのルシフェラーゼ活性を同時検出する高感度アッセイです。緑色発光ウミシイタケルシフェラーゼは実験レポーターとして機能し、構造的に活性化された赤色発光ホタルは標準化コントロールとして機能します。以下の動画が示すように、レポーターとコントロールを組み合わせることで、基質試薬の添加または消光を2段階で行うことなく、実験レポーターとコントロールのルシフェラーゼ活性を1回の読み取りアッセイで同時にモニタリングできます。アッセイの反応液は両方のルシフェラーゼに対応した基質を含み、フラッシュタイプのカイネティクスによって反応は同時に起こります。その結果としての発光シグナルは、フィルターを使用してスペクトル分解できます。1つのサンプルから、調節因子の転写活性、シグナル伝達経路、および活性化因子または阻害因子の効果をアッセイできます。

内容:
細細胞溶解バッファー、反応バッファー、セレンテラジン基質およびD-ルシフェリン

必要なもの:
緑色発光ウミシイタケおよび赤色発光ホタルのルシフェラーゼレポーター、緑色発光ウミシイタケルシフェラーゼ用のフィルター(525 nm±20 nm)と、赤色発光ホタルルシフェラーゼ用のフィルター(615~675 nm)のセット;ルミノメーター、または発光モニタリングが可能な他の機器(Thermo Scientific Luminoskan AscentやVarioskan Flashマイクロプレートリーダーなど);25ウェル以上を同時測定する場合はインジェクターが必要。

アプリケーション:
• 2つの調節因子の同時解析
• 2つのシグナル伝達経路の同時モニター
• 1回のスクリーニングで複数ターゲットを解析(オフターゲット効果など)

緑色発光ウミシイタケは、ホタルおよび天然ウミシイタケルシフェラーゼより明るい生物発光シグナルを放出します。緑色発光ウミシイタケルシフェラーゼタンパク質が生成する生物発光シグナル(λmax = 535 nm)は、セレンテラジンの酸化によって生じます。2つ目のアッセイは赤色発光ホタルルシフェラーゼを使用します。これは、日本ゲンジボタルLuciola cruciataの変異型です。このルシフェラーゼは、ATPの存在下でD-ルシフェリンの酸化から生じる、赤色帯域にシフトした発光スペクトル(λmax = 613 nm)を生成します。

その他の製品データ
ルシフェラーゼレポーターアッセイの同時デュアル発光検出

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Pierce™ Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
アッセイレポーター酵素、ルシフェラーゼレポーターアッセイ
適合する細胞哺乳類細胞
検出法バイオ発光
使用対象 (装置)ルミノメーター(マイクロプレート)
フォーマット384ウェルプレート、96ウェルプレート
標識タイプ酵素標識
製品ラインPierce
数量100反応キット
基質セレンテラジン、D-ルシフェリン
基質特性化学基質
基質タイプルシフェラーゼ基質
対応可能対象100 Dual Luciferase Assays
ターゲットルシフェラーゼ、ホタルルシフェラーゼ、緑ウミシイタケルシフェラーゼ
技術高度化学発光性
タイプアッセイキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
対応範囲:マイクロプレートウェルでのデュアル-ルシフェラーゼアッセイ100回
• Renilla-Firefly Dual Assayバッファー、5 mL(4℃℃保存)
• 100Xセレンテラジン、50 µL(-80℃保存)
• D-ルシフェリン、3 mg(4℃保存)
• Luciferase Cell Lysis Buffer (2X)、6 mL、(室温保存)

キットを受け取り後-80℃で保存、または各コンポーネントを個別に指定温度で保存。

よくあるご質問(FAQ)

What are the advantages of using TurboFect Transfection Reagent (Cat. No. R0533) over other transfection reagents with the Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186)?

The Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186) luciferase vectors were optimized with TurboFect. However, it should be feasible to replace TurboFect with another transfection reagent if your cells tolerate the transfection reagent better and give you acceptable transfection rates.

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Can I store my Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186) cell lysates at -20 degrees C to test later?

The stability of the Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186) may be inconsistent from sample to sample at -20 degrees C. We recommend snap-freezing lysates at -80 degrees C with protease inhibitors to help prevent protein degradation.

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Can I use the Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186) with a luminometer that is not equipped with reagent injectors?

No. All Luciferase Dual Assay Kits, such as the Pierce Renilla-Firefly Luciferase Dual Assay Kit (Cat. Nos. 16185, 16186), are flash-based assays. Flash luminescence reactions give a very bright signal over a short reaction time. Luciferase assays that are flash-based require the use of a luminometer or other luminescence-monitoring instrument equipped with automated reagent injectors.

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I got a high background signal when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla -Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

Here are possible causes and solutions:

- Non-specific oxidation of substrate: Use a new sample; Avoid repeated freezing and thawing of the sample.
- Control sample is contaminated: Change pipette tips after each well; Reduce shaker speed during the cell lysis step to avoid contaminating the wells.

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I got a high signal when I used a Pierce Gaussia/Cypridina/Renilla -Firefly Dual Assay Kit. Why is this?

This could be due to high luciferase expression. Here are some suggestions:

  • Reduce incubation time before collecting samples. 
  • Decrease the integration time on the instrument.
  • Dilute the sample: 
    Note: A low sample volume can increase assay variability. Dilute the sample and use the recommended volume of 10-20 µL per assay.



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