CIAP (Calf Intestinal Alkaline Phosphatase), 20 U/μL

仔ウシ腸アルカリホスファターゼ（CIAP）は、DNAおよびRNAから3´および5´リン酸を除去するホスホモノエステラーゼです。濃度：20ユニット／µLアプリケーション：自己ライゲーションを防ぐためのベクターDNAの5´-リン酸化末端の脱リン酸化（1）。キナーゼでの正反応前の核酸の5´末端の脱リン酸化。ソース：仔ウシ腸粘膜から浄化されます。性能および品質検査：Endodedoxyribonuclease詳細を見る

製品番号（カタログ番号）	数量
18009019	1000 U

製品番号（カタログ番号） 18009019

価格（JPY）

12,500

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仔ウシ腸アルカリホスファターゼ（CIAP）は、DNAおよびRNAから3´および5´リン酸を除去するホスホモノエステラーゼです。

濃度：20ユニット／µL

アプリケーション：自己ライゲーションを防ぐためのベクターDNAの5´-リン酸化末端の脱リン酸化（1）。キナーゼでの正反応前の核酸の5´末端の脱リン酸化。

ソース：仔ウシ腸粘膜から浄化されます。

性能および品質検査：Endodedoxyribonuclease、3' exodedoxyribonuclease、およびリボヌクレアーゼアッセイ。形質転換アッセイで測定される脱リン酸化効率。

ユニット定義：1つのユニットで、37℃で1分間に1µmolの4-ニトロフェニルホスフェートを加水分解します。

ユニット反応条件：1Mのジエタノールアミンバッファー、10 mMの4-ニトロフェニルホスフェート、900µLの0.25 mMのMgCl₂（pH 9.8）、37℃で10分間。

研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。

製品タイプアルカリホスファターゼ

数量1000 U

出荷条件氷水またはドライアイスでの出荷が承認されています

濃度20 U/μL

酵素CIP

Unit SizeEach

組成および保存条件

仔ウシ腸アルカリホスファターゼ（20ユニット／µL）には、10倍の脱リン酸化バッファー（500 mMのTris-HCl（pH 8.5）、1 mMのEDTA）のバイアル、、希釈バッファー（50%グリセロール、25 mMのTris-HCl（pH 7.6）のバイアル、1 mMのMgCl₂、および0.1 mMのZnCl₂が付属しています。仔ウシ腸アルカリホスファターゼは-20℃で保管してください。

よくあるご質問（FAQ）

What other enzymes besides ligase may I need to perform restriction cloning?

Dephosphorylating the vector to decrease background can be achieved with:
Heat Inactivated Alkaline Phosphatase, or Calf Intestinal Alkalline Phosphatase (available as 1 unit/µL or 20 units/µL)

If you need to create blunt phosphorylated DNA ends (“polishing” the ends), you can use:
DNA End Repair Mix or T4 DNA polymerase or Klenow Fragment (large fragment) of E. coli DNA polymerase to generate blunt ends due to their 5' to 3' DNA polymerase activity (filling-in of 5' overhangs) and 3' to 5' exonuclease activity (chewing back of 3' overhangs).

What enzymes can be used to remove 5' phosphate groups, and what enzyme can be used to add the phosphate groups back on?

CIP/CIAP or BAP can dephosphorylate the 5' ends of DNA/RNA. T4 Polynucleotide Kinase can add back phosphate groups.

Why are alkaline phosphatases used in cloning protocols? What is a typical protocol for dephosphorylation of nucleic acids?

Alkaline phosphatases are used to dephosphorylate the 5' ends of DNA. In cloning, it is used to prevent self-ligation of vector DNA. Standard ligation of DNA with ligase requires a 5' phosphate to be present on at least one of the ends being joined. When a DNA insert containing phosphates on both 5' termini is added to a dephosphorylated vector, the insert will be efficiently ligated into the vector, but the vector will not be able to self-ligate. Thus, dephosphorylation of vector lowers the number of background colonies containing vector without insert.