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| 製品番号（カタログ番号） | ユニットサイズ | 価格（JPY） | 在庫と納期 | |
|---|---|---|---|---|
| 20158 | 100 reactions | 価格 128,500 |
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Thermo Scientific LightShift化学発光RNA EMSAキットを使用すると、電気泳動移動度シフトアッセイ（EMSA）によるRNA-タンパク質相互作用の研究を、放射性同位体を用いずに行うことができます。
LightShift化学発光RNA EMSAキットの特長：
•高感度 — 化学発光検出の感度は放射性検出に匹敵
• 迅速 — 1～5分間露光した後でX線フィルムを現像。それに対して、放射性検出システムでは16時間の露光が必要
• 柔軟 — さまざまな方法でビオチン化されたRNAプローブに対応
• 使いやすい — 結合反応やRNAプローブ検出に最適化された試薬がキット一式に含まれる
• 非放射性 — 放射性RNAプローブの廃棄について心配せずに済む
このRNA EMSAキットは、ビオチン化RNAプローブと化学発光基質システムを使用して、従来の32P同位体を用いた方法と同等の感度でRNA-タンパク質複合体を迅速かつ安全に検出します。キット一式には、タンパク質-RNA結合条件のセットアップと最適化に必要なすべての試薬、タンパク質-RNA相互作用のポジティブコントロール、核酸相互作用の化学発光検出用試薬が含まれています。
LightShift化学発光RNA EMSAキットについて
LightShift化学発光RNA EMSAキットは、一般的なDNAゲルシフトアッセイと同様にゲル電気泳動の移動パターンの変化によってタンパク質-RNA相互作用を検出するin vitro手法です。RNA EMSAでは、標識RNAプローブをタンパク質サンプルとインキュベートして結合を開始します。複合体が形成されたら、非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によってサンプルを分離します。RNA-タンパク質複合体は遊離RNAプローブよりもゆっくりと移動するため、その移動距離の差をRNAゲルシフトアッセイで可視化できます。RNA-タンパク質相互作用の特異性は、特異的相互作用のシグナルを減少させる余分な非標識RNAとの結合競合によって検証されています。一般的に、変異RNAまたは非関連RNAのプローブは特異的相互作用に関して競合するとは考えられず、EMSAで検出された場合に特定のバンドシフトの強度を低下させることはありません。LightShift化学発光RNA EMSAキット一式には、RNA-タンパク質複合体形成のポジティブコントロールなど、RNAゲルシフトアッセイのセットアップと最適化に必要なすべての試薬が含まれています。
ビオチン化RNAプローブ、ストレプトアビジン-HRP、および化学発光検出法を使用するLightShift化学発光RNA EMSAキットは、放射性RNAプローブを使用する場合と比較して、感度は同等ですが、検出速度はより高速です。標識RNAプローブを生成するには、ビオチン化ヌクレオチドを使用してランオフin vitro転写反応を行うか、Thermo Scientific Pierce RNA 3'末端ビオチン化キットを使用してRNA鎖の3'末端にビオチンタグを酵素的にライゲーションします。また、市販の標識RNAプローブを購入してもかまいません。LightShift化学発光RNA EMSAキットは、これら3通りの方法のいずれかでビオチン化されたRNAプローブに有効ですが、ランオフin vitro転写で合成したRNAプローブについては、合成中のビオチン化ヌクレオチドの内部取り込みによってRNAの二次構造が影響を受ける可能性があります。そのため、一部の相互作用については、適切なタンパク質-RNA相互作用を発生させるために、カスタム合成されたRNAプローブまたは3'末端ビオチン化プローブが必要になる場合があります。
LightShift化学発光RNA EMSAキットのポジティブコントロールについて
LightShift化学発光RNA EMSAキットに含まれるポジティブコントロールは、鉄反応性エレメント（IRE）RNAプローブです。IRE結合反応は、他の実験サンプルと並行してセットアップされ、検出されます。鉄飢餓状態では、鉄反応性タンパク質（IRP）は細胞中に存在するIRE RNAに結合したままになり、フェリチン（鉄貯蔵タンパク質）とトランスフェリン鉄受容体の翻訳が効果的に抑制されます。鉄が豊富な条件下では、IRE結合活性が失われ、フェリチンおよびトランスフェリンが翻訳されます。この方式はいたるところに存在し、安定したバンドシフトを実現します。ポジティブコントロール反応に200倍モル過剰の非標識IRE RNAをインキュベートすると、特異的IREバンドシフトシグナルは約70%減少するものの、同程度の倍量の非関連RNAプローブでは、IREバンドシフトはほとんど減少しません。これらのコントロールは、各RNAゲルシフト実験に用いることで、タンパク質-RNA複合体の適切なセットアップ、電気泳動、転写、および検出について検証することができます。
関連製品
LightShift™ Chemiluminescent RNA EMSA Kit用tRNA
LightShift化学発光RNA EMSAキットの特長：
•高感度 — 化学発光検出の感度は放射性検出に匹敵
• 迅速 — 1～5分間露光した後でX線フィルムを現像。それに対して、放射性検出システムでは16時間の露光が必要
• 柔軟 — さまざまな方法でビオチン化されたRNAプローブに対応
• 使いやすい — 結合反応やRNAプローブ検出に最適化された試薬がキット一式に含まれる
• 非放射性 — 放射性RNAプローブの廃棄について心配せずに済む
このRNA EMSAキットは、ビオチン化RNAプローブと化学発光基質システムを使用して、従来の32P同位体を用いた方法と同等の感度でRNA-タンパク質複合体を迅速かつ安全に検出します。キット一式には、タンパク質-RNA結合条件のセットアップと最適化に必要なすべての試薬、タンパク質-RNA相互作用のポジティブコントロール、核酸相互作用の化学発光検出用試薬が含まれています。
LightShift化学発光RNA EMSAキットについて
LightShift化学発光RNA EMSAキットは、一般的なDNAゲルシフトアッセイと同様にゲル電気泳動の移動パターンの変化によってタンパク質-RNA相互作用を検出するin vitro手法です。RNA EMSAでは、標識RNAプローブをタンパク質サンプルとインキュベートして結合を開始します。複合体が形成されたら、非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動によってサンプルを分離します。RNA-タンパク質複合体は遊離RNAプローブよりもゆっくりと移動するため、その移動距離の差をRNAゲルシフトアッセイで可視化できます。RNA-タンパク質相互作用の特異性は、特異的相互作用のシグナルを減少させる余分な非標識RNAとの結合競合によって検証されています。一般的に、変異RNAまたは非関連RNAのプローブは特異的相互作用に関して競合するとは考えられず、EMSAで検出された場合に特定のバンドシフトの強度を低下させることはありません。LightShift化学発光RNA EMSAキット一式には、RNA-タンパク質複合体形成のポジティブコントロールなど、RNAゲルシフトアッセイのセットアップと最適化に必要なすべての試薬が含まれています。
ビオチン化RNAプローブ、ストレプトアビジン-HRP、および化学発光検出法を使用するLightShift化学発光RNA EMSAキットは、放射性RNAプローブを使用する場合と比較して、感度は同等ですが、検出速度はより高速です。標識RNAプローブを生成するには、ビオチン化ヌクレオチドを使用してランオフin vitro転写反応を行うか、Thermo Scientific Pierce RNA 3'末端ビオチン化キットを使用してRNA鎖の3'末端にビオチンタグを酵素的にライゲーションします。また、市販の標識RNAプローブを購入してもかまいません。LightShift化学発光RNA EMSAキットは、これら3通りの方法のいずれかでビオチン化されたRNAプローブに有効ですが、ランオフin vitro転写で合成したRNAプローブについては、合成中のビオチン化ヌクレオチドの内部取り込みによってRNAの二次構造が影響を受ける可能性があります。そのため、一部の相互作用については、適切なタンパク質-RNA相互作用を発生させるために、カスタム合成されたRNAプローブまたは3'末端ビオチン化プローブが必要になる場合があります。
LightShift化学発光RNA EMSAキットのポジティブコントロールについて
LightShift化学発光RNA EMSAキットに含まれるポジティブコントロールは、鉄反応性エレメント（IRE）RNAプローブです。IRE結合反応は、他の実験サンプルと並行してセットアップされ、検出されます。鉄飢餓状態では、鉄反応性タンパク質（IRP）は細胞中に存在するIRE RNAに結合したままになり、フェリチン（鉄貯蔵タンパク質）とトランスフェリン鉄受容体の翻訳が効果的に抑制されます。鉄が豊富な条件下では、IRE結合活性が失われ、フェリチンおよびトランスフェリンが翻訳されます。この方式はいたるところに存在し、安定したバンドシフトを実現します。ポジティブコントロール反応に200倍モル過剰の非標識IRE RNAをインキュベートすると、特異的IREバンドシフトシグナルは約70%減少するものの、同程度の倍量の非関連RNAプローブでは、IREバンドシフトはほとんど減少しません。これらのコントロールは、各RNAゲルシフト実験に用いることで、タンパク質-RNA複合体の適切なセットアップ、電気泳動、転写、および検出について検証することができます。
関連製品
LightShift™ Chemiluminescent RNA EMSA Kit用tRNA
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
仕様
アッセイ
EMSAアッセイ
検出法
化学発光
フォーマット
キット
サンプルタイプ
タンパク質
使用対象 (装置)
myECL™イメージャー、X線フィルム
反応数
100
製品ライン
LightShift™
製品タイプ
LightShift化学発光RNA EMSAキット
標的特異性
非標的特異的
技術
強化された化学発光、メンブレンブロット、ゲルシフト
組成および保存条件
対応範囲：1,000 cm2のメンブレン（10個のミニゲルブロット）を使用した100回の結合反応および検出• 125 nMビオチン化IRE RNAコントロール、35 µL（-20℃で保管）
• 10 µM非標識IRE RNAコントロール、25 µL（-20℃で保管）
• 2 mg/mL細胞質肝臓抽出物、50 µL（-20℃で保管）
• 10 mg/mL tRNA、100 µL（-20℃で保管）
• 10倍REMSA結合バッファー、1 mL（-20℃で保管）
• 50%グリセロール、500 µL（-20℃で保管）
• 2M KCl、500 µL（-20℃で保管）
• 1M MgCl2、500 µL（-20℃で保管）
• DTT、凍結乾燥（-20℃で保管）
• ヌクレアーゼフリー水、1.5 mL（-20℃で保管）
• 5倍REMSAローディングバッファー、1 mL（-20℃で保管）
• 安定化ストレプトアビジン-HRP、1.5 mL（4℃で保管）
• ルミノール／エンハンサー溶液、80 mL（4℃で保管）
• 安定過酸化物溶液、80 mL（4℃で保管）
• 核酸検出ブロッキングバッファー、500 mL（4℃で保管）
• 4倍洗浄バッファー、500 mL（4℃で保管）
• 基質平衡バッファー、500 mL（4℃で保管）
• 10 µM非標識IRE RNAコントロール、25 µL（-20℃で保管）
• 2 mg/mL細胞質肝臓抽出物、50 µL（-20℃で保管）
• 10 mg/mL tRNA、100 µL（-20℃で保管）
• 10倍REMSA結合バッファー、1 mL（-20℃で保管）
• 50%グリセロール、500 µL（-20℃で保管）
• 2M KCl、500 µL（-20℃で保管）
• 1M MgCl2、500 µL（-20℃で保管）
• DTT、凍結乾燥（-20℃で保管）
• ヌクレアーゼフリー水、1.5 mL（-20℃で保管）
• 5倍REMSAローディングバッファー、1 mL（-20℃で保管）
• 安定化ストレプトアビジン-HRP、1.5 mL（4℃で保管）
• ルミノール／エンハンサー溶液、80 mL（4℃で保管）
• 安定過酸化物溶液、80 mL（4℃で保管）
• 核酸検出ブロッキングバッファー、500 mL（4℃で保管）
• 4倍洗浄バッファー、500 mL（4℃で保管）
• 基質平衡バッファー、500 mL（4℃で保管）
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