Staphylococcus aureus V-8 Protease

エンドプロテイナーゼGlu-Cとも知られるThermo Scientific黄色ブドウ球菌V-8プロテアーゼには、2つの最適pHがあり、1つはpH 4.0、もう1つはpH 7.8です。グルタミン酸およびアスパラギン酸残基のカルボン酸末端での切断に特異的です。プロテアーゼは、緩衝液中のグルタミン消化のみに特異的であり、いずれの最適pHでもリン酸を含みません。pH 7.8のリン酸緩衝液は、グルタミン酸残基とアスパラギン酸残基の両方で消化を促進します。

黄色ブドウ球菌V-8プロテアーゼの特長：

•特異性 — グルタミン酸の特異性は、重炭酸アンモニウムpH 7.8または酢酸アンモニウムpH 4で達成されます
• 活性—酵素は、SDS、尿素、グアニジン-HClなどの多くの変性剤の存在下で活性があります

黄色ブドウ球菌 V-8プロテアーゼは非常に安定しており、6 M尿素、5.5 Mグアニジン·HCl、0.5% SDS、または0.5% SDS + 6 M尿素、0°C、pH 7.6でもその活性を維持することができます。これは、プロテアーゼの天然構造が主に静電相互作用によって安定化され、水素結合やβ構造によって安定化されていないという事実に関連しています。

タンパク質消化には、2つの大きな問題があります。最初の問題は、反応を消光して消化を停止させ、サンプルを希釈する必要があることです。2つ目の問題は、サンプルがプロテアーゼで汚染されており、場合によっては自己消化プロテアーゼ断片で汚染されているということです。これらの問題は、固定化V-8プロテアーゼで表面化します。固定化プロテアーゼでは、クエンチは不要で、サンプルのプロテアーゼ汚染やプロテアーゼの自動消化に問題はありません。サンプル溶液をアガロースマトリックスから分離するだけで、これらの問題が解消されます。

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