Immobilized Papain (Agarose Resin)

Thermo Scientific Pierce固定化パパインは、アガロースビーズ樹脂上に固定化されたシステインエンドペプチダーゼ（パパイン）で構成されており、抗体からFab断片を生成および精製できます。

パパインは、パパイヤラテックスから単離された非特異的なシステインエンドペプチダーゼで、さまざまなアプリケーションで使用されます。システインの存在下で、IgG分子をパパインとともにインキュベーションすると、1つ以上のヒンジ領域のペプチド結合が開裂し、類似したサイズの3つの断片（2つのFab断片と1つのFc断片）が生成されます。Fc断片は、固定化されたタンパク質Aまたはイオン交換クロマトグラフィーを使用してFab断片から分離できます。

50キロダルトンFc断片は、抗原結合の干渉を受けずにFc受容体の特異性を測定するためによく使用されます。Fabフラグメントは、インタクトIgGよりも組織に浸透するため、免疫組織化学研究に有用です。また、Fc受容体からの非特異的結合は、イムノグロブリンのFab部分のみを使用することで回避されます。

パパインを使用して、F(ab')2断片を生成することもできます。F(ab')2断片を調製するには、まず10 mMシステインでパパインを活性化し、ゲルろ過により除去します。パパイン消化中にシステインがまったく存在しなくなると、F(ab')2断片が生成されます。多くの場合、これらの断片は変動的で、再現性が問題となります。

固定化したパパインは、ほとんどすべてのアプリケーションで遊離パパインに置き換えることができます。これは、自己消化をほとんど除去し、プロテアーゼによるサンプルの汚染を除去し、パパインを除去するか、固定化したパパインカラム上でサンプルの流れを制御することで消化を制御できるため、有利です。また、固定化パパインは熱誘発変性に対して安定性が高く、その結果、活性の維持が長くなります。ImmunoPure Fab調整キットには、固定化パパイン、その他の必要な試薬、およびヒト、ウサギ、マウスの抗体消化用に最適化されたプロトコルが含まれています。