Pierce™ BCA Protein Assay Reagent A
Pierce™ BCA Protein Assay Reagent A
Thermo Scientific™

Pierce™ BCA Protein Assay Reagent A

BCA Protein Assay Reagent AはPierce BCA Protein Assay Kitのコンポーネントです。このキットは詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
23228500 mL
232223.75 L
23221250 mL
232231 L
製品番号(カタログ番号) 23228
価格(JPY)
28,700
Each
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数量:
500 mL
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BCA Protein Assay Reagent AはPierce BCA Protein Assay Kitのコンポーネントです。このキットは、タンパク質標準物質と比較して総タンパク質濃度を測定するのに使用する、2コンポーネントの高精度界面活性剤適合アッセイです。Pierce BCA試薬は、タンパク質研究で扱うほとんどのサンプルタイプでタンパク質濃度を正確に測定します。Pierce BCAアッセイを使用して、全細胞ライセートの収量、アフィニティーカラム分画、および精製タンパク質を測定したり、産業アプリケーションにおけるタンパク質汚染をモニターできます。BCAアッセイはほとんどの色素結合法と比較して、タンパク質組成の違いによる影響をはるかに受けにくく、タンパク質が異なっても優れた均一性を実現します。

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Pierce BCA Protein Assay Kit(Reagents AおよびB)の特長:
比色分析—目視による推定、または標準的な分光光度計やプレートリーダー(562nm)による測定
均一性—色素結合法(Bradford)よりもタンパク質間のばらつきが少ない
適合性—一般的な濃度のほとんどのイオン性および非イオン性界面活性剤に影響されない
アッセイ時間—インキュベーションは30分;従来のLowry法よりも容易で4倍高速
アッセイ範囲—BSAの直線測定範囲は200~2,000 µg/mL
感度—増強プロトコルにより5 µg/mLまで検出

アッセイの作用機序
BCA Protein Assayは、アルカリ媒体中でのタンパク質によるCu2+からCu1+へのよく知られた還元反応と、ビシンコンニン酸(BCA)による第一銅陽イオン(Cu1+)の高感度で選択的な比色検出を組合わせています。最初のステップでは、アルカリ性環境で銅とタンパク質がキレートして淡青色の錯体を形成します。ビューレット反応として知られるこの反応では、酒石酸カリウムナトリウムを含有するアルカリ環境で、3つ以上のアミノ酸残基を含有するペプチドが第二銅イオンと有色キレート錯体を形成します。

発色反応の2番目のステップでは、ステップ1で形成された還元(第一銅)陽イオンとBCAが反応します。BCAの2つの分子と1つの銅イオンがキレートすることで、濃い紫色の反応生成物が生成されます。BCA/銅錯体は水溶性で、タンパク質濃度の増加に比例して562 nmで強い線形吸光性を示します。この錯体は、最初の反応で生成される淡青色の錯体よりも約100倍高感度(すなわち検出限界が低い)です。

この反応は、タンパク質のアミノ酸配列にある4つのアミノ酸残基(システイン、シスチン、チロシン、トリプトファン)による影響を強く受けます。ただし、Coomassie色素結合法とは異なり、普遍的なペプチドバックボーンは色形成にも寄与するため、タンパク質組成の違いによるばらつきを最小限に抑えます。

関連製品
Pierce BCA Protein Assay Kit
Pierce BCA Protein Assay Reagent B
Pierce BCA Solid
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
アッセイタンパク質定量アッセイ
概要Pierce BCA Protein Assay Reagent A
使用対象(アプリケーション)溶液ベースの検出、吸光度
使用対象 (装置)分光光度計、マイクロプレートリーダー
製品ラインPierce
製品タイプProtein Quantitation Assay
数量500 mL
特異性非標的特異的
検出法比色法
Unit SizeEach
組成および保存条件
室温保存。

よくあるご質問(FAQ)

Which Thermo Scientific protein assay is the best or the most reliable?

The choice of protein assay is dependent on preferences related to assay speed, accuracy and sensitivity, as well as interfering substances in the sample to be assayed. BCA has less protein-to-protein variation, is compatible with most detergents, and has larger working range. Pierce Bradford Plus Protein Assay Kit (Cat. Nos. 23236, A55866) is compatible with reducing sugars, is more sensitive and is faster and easier to use. For a comparison of different protein assays and compatible reagents, see our Tech Tip: Protein Quantitation Assay Compatibility Table (https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets/LSG/Application-Notes/TR0068-Protein-assay-compatibility.pdf).

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What substances interfere with the BCA Protein Assay?

Reducing agents, copper chelators and solutions with very high buffering capacities will interfere with the BCA assay. Reducing agents reduce the copper and will produce a high background. Copper chelators bind the copper and prevent it from being detected by the BCA reagent. High-capacity buffers prevent the BCA from reaching its optimal alkaline pH. For a complete list of compatible substances, please refer to the BCA Protein Assay Kit product instructions.

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What is the sample to working reagent ratio when using the BCA Protein Assay Kit?

For the Microplate Protocol the sample to working reagent (WR) ratio is 1:8 (25 µl sample plus 200 µl WR). If the sample amount is limited, a 1:20 ratio may be used (10 µl sample); in this case, however, the detection range of the assay will be limited to 125-2,000 µg/ml. For the Test Tube Procedure (Standard or Enhanced Protocols) the ratio is 1:20 (0.1 ml sample plus 2.0 ml WR). In the Micro BCA Assay Kit (for both Microplate and Test Tube Procedures), the ratio is 1:1 (1 part sample plus 1 part WR).

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What is the detection range for the BCA Protein Assay?

For the standard protocol, the detection range is 20-2,000 µg/ml. For the enhanced test tube protocol, the detection range is 5-250 µg/ml. The Micro BCA Protein Assay Reagent will detect 0.5-20 µg/ml of protein in the test tube assay and 1-20 µg/ml for the microplate assay.

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How can interfering substances be eliminated from the protein sample when using the BCA Protein Assay Kit?

There are several ways to adjust a sample to be compatible with the BCA Protein Assay: • Remove the interfering substance by dialysis or gel filtration. • If the starting protein concentration of the sample is high, dilute the sample to the point that the substance no longer interferes. • Eliminate interference by copper-chelating agents by increasing the amount of copper in the working reagent (use 4 ml or 6 ml of Reagent B/100 ml of Reagent A instead of the 2 ml of Reagent B/100 ml of Reagent A that is called for in the instructions). • Precipitate sample proteins with cold acetone or trichloroacetic acid (TCA).

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