Pierceクマシープラス(Bradford)タンパク質アッセイは、すぐに使用可能な、還元剤に適合する、改善されたBradfordアッセイ試薬で、総タンパク質濃度をタンパク質標準液を比較し、迅速に測定します。Pierceクマシープラスアッセイ試薬を使用すると、他の市販のBradfordアッセイ製剤の直線性が向上し、タンパク質間のばらつきが半減します。
使用可能なすべてのBradfordアッセイを比較›クマシープラスタンパク質アッセイの機能には以下が含まれます。
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比色分析— 標準的な分光光度計または595 nmのプレートリーダーを使用して測定
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使いやすい— 1液タイプで試薬の調製は不要
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迅速— ほぼ直後の色開発、結果の追加、混合、読み取り
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アッセイの範囲— 1-1500 µg/mLの範囲のタンパク質濃度を検出
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向上— 従来のBradford調剤に比べ、直線性と応答性の均一性を改善
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フレキシブル—マイクロプレートおよびキュベットプロトコルが提供され、複数のターゲット作業範囲に適合
Pierceクマシープラスアッセイ試薬は、タンパク質濃度を測定するための1液かつすぐに使用できる溶液です。サンプルまたは標準品と試薬を等量ずつ混合し、595 nmで吸光度測定するだけです。このアッセイは、試験管またはマイクロプレートのいずれかのフォーマットで実施できます。このタンパク質アッセイは、タンパク質サンプル中のほとんどの塩分、溶媒、バッファー、チオール、還元剤、および金属キレート座位に適合します。
クマシープラス(Bradford)アッセイによるタンパク質の検出総タンパク質の検出および定量に使用する比色試薬でのクマシーG-250色素の使用については、1976年にMarion Bradford博士が最初に指摘しました。試薬の酸性環境では、タンパク質はクマシー色素に結合します。その結果、色素の赤茶色形態(最大吸光度465 nm)から青色形態(最大吸光度610 nm)へのスペクトルシフトが発生します。この2種類の色素の差は595 nmで最も大きくなるため、この波長がクマシー色素-タンパク質複合体の青色を測定するために最適です。必要に応じて、575 nm~615 nmの任意の波長で青色を測定できます。両極端(575 nmおよび615 nm)では、測定された色の量(吸光度)が 595 nmで得られた量と比較して約10%低下します。
クマシー色素ベース(Bradford)タンパク質アッセイにおける色の開発は、タンパク質に含まれる特定の塩基性アミノ酸(主にアルギニン、リジン、ヒスチジン)の存在に関連しています。ファンデルワールス力と疎水性相互作用も、タンパク質による色素の結合に関与します。各タンパク質分子に結合したクマシー色素リガンドの数は、タンパク質上で検出された陽性電荷の数にほぼ比例します。遊離アミノ酸、ペプチド、低分子量タンパク質は、クマシー色素試薬では発色しません。一般的に、この試薬でアッセイするには、ペプチドまたはタンパク質の質量が3,000ダルトン以上である必要があります。
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