Pierce™ Phosphoprotein Phosphate Estimation Assay Kit

Thermo Scientificリン酸化タンパク質リン酸推定キットを使用すると、リン酸化（セリンおよびスレオニン）としてのタンパク質の分類と同定、およびリン酸化レベルの半定量的評価を行うことができます。

リン酸化タンパク質リン酸塩推定キットの特徴：

•特異的—測定はホスホセリン（p-Ser）およびホスホトレオニン（p-Thr）のみです。ホスホチロシン（p-Tyr）は測定されません。
• 便利—試験管および96ウェルマイクロプレートプロトコルが含まれており、所要時間は90分未満
• 半定量的—付属のホスビチン標準を使用してタンパク質のモルあたりのリン酸（P）のモル数を計算
• カスタマイズ可能—以前に特性評価された標準液が利用可能な場合は、フォーマットが高純度のリン酸化タンパク質に対する特定のアッセイの開発に適応

リン酸化タンパク質リン酸見積もりアッセイキットは、精製タンパク質サンプルの状態とリン酸化の程度の特性評価をサポートするように設計されています。このアッセイでは、リン酸化タンパク質においてセリル残基およびスレオニル残基のアルカリ加水分解で遊離するリン酸基をマラカイトグリーンとモリブデンアンモニウムを用いて検出しています。このアッセイは96ウェルマイクロプレートまたは試験管で簡単に実施でき、約1時間で完了します。

アプリケーション：
• ホスホセリンまたはホスホトレオニンのリン酸化を含むタンパク質を同定します。
•pSおよびpTリン酸化の量を推定します。
•特性が明確なリン酸化タンパク質の特異的定量アッセイを開発します。

このアッセイは、精製タンパク質にリン酸化セリン（p-Ser）またはリン酸化スレオニン（p-Thr）のいずれが含まれているかを特定し、このタイプのリン酸化のレベルを推定するために使用できます。定量では、テストタンパク質サンプルを既知のリン酸化レベルのリン酸化タンパク質である特定濃度のホスビチンと比較します。アルカリ性加水分解ステップでは、ペプチド結合のリン酸化チロシン（p-Tyr）残基からリン酸塩は放出されません。そのため、未知の精製タンパク質調製の結果が陰性の場合は、（1）リン酸化タンパク質ではないか、（2）チロシン残基のみでリン酸化されていることを示します。後者の場合は、抗リン酸化チロシン抗体を用いたウェスタンブロット分析がこれら2つの可能性を区別するために必要です。