Pierce™ Crosslink IP Kit

Thermo Scientific Pierce架橋IPキットは、従来のIP法に基づき、IP抗体をProtein A/Gアガロースに架橋するための試薬やプロトコルを加え、抗体による汚染のない抗原免疫沈降を可能にします。

こうした特長によって得られる最大の利点は、抗体による汚染を生じさせずに標的タンパク質を精製できること、およびアガロースレジンビーズからサンプルをより効果的に洗浄、分離できることです。

架橋IPキットの特長：

•抗体による汚染を排除 — 抗体はアガロースビーズに不可逆的に結合するため、重鎖および軽鎖の精製タンパク質との共溶出を最小限に抑制
• 簡単で効率的なスケーラビリティ — 1回のIP実験に必要な量だけの抗体を使用することも、複数回の実験用に100～200 µgの抗体を固定化して、IPアフィニティーレジンを調製して準備しておくことも可能
• アッセイの信頼性とサンプル処理 — Pierceスピンカラムはレジンのロスを抑制し、マイクロ遠心分離チューブのみを使用する従来のIP法より効率的に溶液を分離可能
• 調製した抗体アフィニティーレジンを再利用可能 — 抗体は共有結合的に固定化され、穏やかな溶出手順では通常は不活性化されないため、多くの場合はレジンの数回の再利用が可能
• 包括的なキット — パッケージには、50回以上の抗体固定化およびIP実験を実施するために十分な量の試薬およびスピンカラムを同梱

アプリケーション：
• 免疫沈降と、その後のタンパク質電気泳動および切り出しによる質量分析またはシーケンシング同定解析
• 重鎖または軽鎖抗体フラグメントと同程度の分子量を持つ標的タンパク質に対する免疫沈降およびSDS-PAGE解析
• 標的タンパク質の免疫沈降と、その後の非変性的な手法（SDS-PAGEを伴わない手法）による解析

Pierce架橋IPキットでは、Protein A/Gアガロースレジンと結合したIP抗体を、スベリン酸ジサクシンイミジル（DSS）との架橋により、担体に共有結合的に固定化します。抗体を固定化したレジンは、目的のタンパク質抗原を含むサンプルとインキュベーションして、抗体-抗原複合体を形成させます。洗浄し、サンプルから非結合の（おそらく望ましくない）成分を除去した後、キットに含まれている溶出バッファーを使用して抗体から解離することにより、抗原を回収できます。手順全体をマイクロ遠心分離機スピンカップで行うため、遠心分離を短時間行うだけで、溶液をアガロースレジンから完全に分離できます。この手順によって抗原だけが溶出するため、抗体フラグメントによる干渉を受けることなく、抗原を同定してさらに解析することができます。また、抗体樹脂は多くの場合、以降の免疫沈降に再利用できます。

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