Pierce™ Co-Immunoprecipitation Kit
Pierce™ Co-Immunoprecipitation Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Co-Immunoprecipitation Kit

Thermo Scientific Pierce共免疫沈降(Co-IP)キットは、共有結合による抗体固定化を用い、最終産物に抗体の干渉を及ぼすことなく、適切に制御したCo-IP実験を実施するために必要となるすべてのコンポーネントを提供します。Co-IPはタンパク質間の相互作用を研究するための一般的な手法であり、抗体を使用して抗原詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
261491キット
製品番号(カタログ番号) 26149
価格(JPY)
111,000
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数量:
1キット
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Thermo Scientific Pierce共免疫沈降(Co-IP)キットは、共有結合による抗体固定化を用い、最終産物に抗体の干渉を及ぼすことなく、適切に制御したCo-IP実験を実施するために必要となるすべてのコンポーネントを提供します。

Co-IPはタンパク質間の相互作用を研究するための一般的な手法であり、抗体を使用して抗原(ベイトタンパク質)を免疫沈降させ、相互作用するタンパク質(プレイタンパク質)を共免疫沈降させます。Protein AまたはGを使用する従来のCo-IP法では、抗体の重鎖と軽鎖が共溶出し、関連するバンドと共に移動してしまい、重要な結果が明確に得られなくなることがあります。Pierce Co-IPキットでは、アミン反応性レジンに抗体を共有結合させることで、この問題を解決します。このキットには、タンパク質の結合および回収用に最適化されたバッファー、コントロール実験を実施するための各種試薬のほか、プロトコルを短縮し、処理と混合操作を最小限に抑える効率的なスピンカラムおよび収集チューブが含まれます。

共免疫沈降キットの特長:

さまざまな精製抗体に適合 — 生物種やIgクラスを問わず、さまざまな精製抗体を使用した共免疫沈降実験が可能(チキンIgY、ヒトIgE、マウスIgG1、IgMなど)。Protein AおよびProtein Gのアフィニティー結合に依存しない
抗体干渉なし — 共有結合法と非還元溶出システムを用いることで、IP抗体による汚染を生じさせず、純粋なCo-IP産物を生成
再利用可能な抗体ビーズ — 共有結合による抗体固定化では、調製したIPレジンを再利用でき、抗体にかかるコストを節約可能
包括的なキット — 抗体を固定化し、IP実験を何度も実施するために必要なすべての試薬(結合バッファー、洗浄バッファー、溶出バッファー)、およびレジン操作をより簡便に、より効率化するマイクロ遠心分離スピンカラムを同梱
コントロールビーズを同梱 — 非特異的結合のネガティブコントロールとして使用するための非誘導体化アガロースビーズを同梱
汎用性 — Co-IP法は、特異的な抗体-抗原複合体およびタンパク質相互作用複合体に適合する、生理的(非変性的)なあらゆるタンパク質サンプルバッファーに対応

共免疫沈降(Co-IP)は、タンパク質の相互作用を発見するために一般的に使用されるin-vitro手法です。Pierce共免疫沈降(Co-IP)キットは、トラブルの元となるIP抗体が含まれない、純粋なIPおよびCo-IP産物を生成するCo-IP実験を効率的に実施するために必要となる各種ツールを提供するように構成されています。Protein A/GアガロースビーズをAminoLink Plusレジンに置き換え、従来のCo-IP技術を改良したキットであり、純粋なIP抗体がこのレジンに直接、恒久的に結合します。穏やかな(非還元、非変性)溶出バッファーにより、アガロースビーズ上に固定化された抗体はそのまま保持しつつ、IP標的を解離できます。この結果、抗体による干渉を受けることなく、ウェスタンブロッティング(またはシーケンシング)によって分析可能な純粋な生成物が得られます。

IP抗体による汚染を排除できるだけでなく、Pierce共免疫沈降キットに組み込まれた抗体結合法により、Protein AおよびProtein Gを使用した従来の手法で生じうる非特異的結合の相互作用や浸出による汚染も回避できます。この結合法では、BSA、ゼラチン、またはその他の保存用タンパク質安定化剤を含まないアミンフリーのバッファーに開始抗体を添加する必要がありますが、Protein AまたはProtein Gに依存しないという事実は、どのような抗体種やクラスでも免疫沈降法に使用できることを意味します(IgM、チキンIgYなど)。実際に、精製されたタンパク質はすべて、固定化して結合パートナーのアフィニティー精製に使用できます。
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
アッセイアフィニティー精製
使用対象(アプリケーション)免疫沈降(IP)
使用対象 (装置)微量遠心機
フォーマットKit
数量1キット
対応可能対象50反応
ターゲット非標的特異的
製品ラインPierce
タイプ免疫沈降キット
Unit SizeEach
組成および保存条件
対応範囲:50反応分のCo-IPの調製および実施(反応1回につき樹脂25 µL)
• AminoLink Plus結合樹脂、2 mL
• 結合バッファー(20倍)、25 mL
• シアノ水素化ホウ素ナトリウム溶液(5M)、0.5 mL
• 消光バッファー、50 mL
• 洗浄溶液、60 mL
• IP溶解/洗浄バッファー、2 x 50 mL
• ダルベッコ改変PBS(20倍)、25 mL
• 調整バッファー(100倍)、5 mL
• 溶出バッファー、50 mL
• レーンマーカーサンプルバッファー(5倍)、5 mL
• Pierceスピンカラム、スクリューキャップ、50カラム
• マイクロ遠心分離用コレクションチューブ、2 mL、100本
• マイクロ遠心分離用コレクションチューブ、1.5 mL、50本
• Pierceコントロールアガロース樹脂、2 mL

4℃で保存してください。

よくあるご質問(FAQ)

What is the shelf life of the Pierce Co-Immunoprecipitation Kit (Cat. No. 26149)?

The Pierce Co-Immunoprecipitation Kit is covered under our general 1-year warranty and is guaranteed to be fully functional for 12 months from the date of shipment, if stored as recommended (4 degrees C). Please see section 8.1 of our Terms & Conditions of Sale for more details.

Can I use samples harvested using my own Lysis Buffer with the Thermo Scientific Co-Immunoprecipitation Kit?

Yes, but the IP Lysis/Wash Buffer is formulated to be an efficient lysing agent that is gentle to proteins. The exclusion of ionic detergents and pH extremes help to preserve protein: protein interactions improving the results of recovering both antigen and its interacting partners at the elution step (versus interating partners being lost in the wash steps).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Why does the Thermo Scientific Co-Immunoprecipitation Kit include a Conditioning Buffer (100X)?

The conditioning buffer helps with the wash and especially to provide the correct environment to enhance the efficiency of the low pH Elution Buffer. The overall result is more antigen recoved in the first volume of elution (more concentrated antigen).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Can I choose to immobilize an un-purified antibody with the Thermo Scientific Co-Immunoprecipitation Kit?

No, we do not recommend immobilizing an un-purified antibody; a purified antibody is required. The AminoLink Coupling Resin that is included will react with primary amines that are found on the surface of virtually all proteins, resulting in immobilization of many other proteins along with the antibody. This will reduce the amount of antibody immobilized, resulting in less antigen and interacting partners being purified. It can also result in higher background as other proteins in the sample may bind to the other immobilized proteins and co-elute with the antigen and interacting partners, contaminating them.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

The protocol recommends using 10 - 75 µg of antibody with the Thermo Scientific Co-Immunoprecipitation Kit, is it possible to use a different amount?

Yes, the product manual includes “Table 1. Amounts of antibody, coupling resin, wash buffer and elution buffer to use” that allows researchers to scale their affinity purification using 5 - 1,000 µg of antibody. We do not recommend going below 5 µg of antibody. This was the smallest amount of antibody tested inhouse. The rationale to stop at 5 µg of antibody is that it was felt that an extremely strong affinity between the antibody and antigen would be required to get sensitive, reproducible results with less antibody to capture the antigen and interacting partners.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.