Pierce™ Agarose ChIP Kit
Pierce™ Agarose ChIP Kit
Thermo Scientific™

Pierce™ Agarose ChIP Kit

Thermo Scientific PierceアガロースChIPキットは、クロマチン免疫沈降(ChIP)アッセイを行うための試薬一式と、シンプルかつ迅速で再現性のあるプロトコルを提供します。アガロースChIPキットの特長:•シンプルかつ迅速なChIPアッセイプロトコル(8時間未満)•詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
2615630反応キット
製品番号(カタログ番号) 26156
価格(JPY)
164,600
Each
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数量:
30反応キット
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Thermo Scientific PierceアガロースChIPキットは、クロマチン免疫沈降(ChIP)アッセイを行うための試薬一式と、シンプルかつ迅速で再現性のあるプロトコルを提供します。

アガロースChIPキットの特長:

•シンプルかつ迅速なChIPアッセイプロトコル(8時間未満)
• 効率性の高い核の単離と溶解
• 簡便かつ再現可能な酵素消化
• バックグラウンドが低く結合能の高いProtein A/Gアガロースレジン
• 特異性の高いポジティブコントロールが付属:RNAポリメラーゼII抗体とGAPDH PCRプライマー
• 迅速で再現性のあるスピンカラムフォーマット
• 回収率の高いDNA精製
• ChIP検証済み抗体を利用可能

PierceアガロースChIPキットには、最適化されたプロトコルと便利なスピンカラムフォーマットを使用して、適切なコントロールで30回のChIPアッセイを実行するのに十分な試薬が含まれています。PierceアガロースChIPキットと一緒に、ChIP検証済みで品質保証された抗体を使用することもできます。ウェスタンブロッティングに使用できる抗体は、ChIPアッセイでは機能しない可能性があるため、当社では、もっとも一般的なChIP検証済みモノクローナルおよびポリクローナル抗体をここで構築して、実験のセットアップから結果により迅速に移行できるよう支援しています。

ChIPアッセイの強みは、生細胞で発生する特定のタンパク質-DNA相互作用のスナップショットを取得し、標準PCRまたは定量PCRを使用して相互作用を定量できることです。ChIPアッセイを成功させるには、標的ゲノムDNA配列を検出する前に、いくつかの重要なステップ(架橋、クロマチン調製、免疫沈降)を実施する必要があります。ChIPプロトコルの各ステップは、それぞれ最適化するのに時間のかかることがあります。Pierce Agarose ChIP Assay Kitではプロセスが簡素化され、正確で再現性のある結果を容易に得られます。

Pierce Agarose ChIP Kitを使用してChIPアッセイを行うには、タンパク質-DNA複合体を安定化してから抽出します。in vivo架橋は、従来はホルムアルデヒドを使用して実現されます。細胞内で直接行われた架橋は、タンパク質-DNA複合体内に固定され、これらの不安定で時に一過性の相互作用がトラップされます。架橋複合体を溶解、抽出、可溶化するために、ChIPアッセイキットにはThermo Scientificクロマチン調製モジュール(別売もあり、製品番号26158)が含まれています。このChIPアッセイキット一式は、クロマチン結合DNAを単離し、目的のタンパク質のサンプルを濃縮するための信頼性が高くシンプルかつ便利な手段を提供します。他の細胞成分からの混入は15%未満で、Dounceホモジナイザーは不要です。

関連製品
Pierce™クロマチン調製モジュール
Pierce™ ChIPグレードProtein A/G Plusアガロース
プロティナーゼK
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
結合能>50 mgのヒトIgG/mLレジン結合能
概要PierceアガロースChIPキット
フォーマットKit
数量30反応キット
対応可能対象30反応
容量(メートル法)≥50 mg Human IgG per mL Resin Binding
製品ラインPierce
タイプアガロースChIPキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
対応範囲:30回の完全なクロマチンIPアッセイ実験• ChIPグレードProtein A/G Plusアガロース、0.65 mL(4℃で保存)
• IP希釈/洗浄バッファー(5倍)、11 mL(4℃で保存)
• IP洗浄バッファー3(5倍)、4.5 mL(4℃で保存)
•IP溶出バッファー(2倍)、4.5 mL(4℃で保存)
• カラムアクセサリーパック、3パック(室温または4℃で保存)
• マイクロ遠心分離チューブ(1.5 mL)、75本(室温または4℃で保存)
• DNAクリーンアップカラム、40本(室温または4℃で保存)
• DNAカラム結合溶液、30 mL(室温または4℃で保存)
• DNAカラム洗浄液、6 mL(室温または4℃で保存)
• pHインジケーター、0.8 mL(室温または4℃で保存)
• DNAカラム溶出液、5 mL(室温または4℃で保存)
• 抗RNAポリメラーゼII抗体、25 µL(-20℃で保存)
• 標準ウサギIgG(1 mg/mL)、10 µL(-20℃で保存)
• ChIPポジティブコントロールプライマー(GAPDHプロモーター、ヒト特異的)、100 µL(-20℃で保存)
• Pierceクロマチン調製モジュール(製品番号26158)(プロティナーゼKおよびミクロコッカスヌクレアーゼは-20℃、他のすべてのコンポーネントは4℃で保管)

よくあるご質問(FAQ)

I am having trouble with leaking columns while using the Pierce Agarose ChIP Kit (Cat. No. 26156). How can I resolve this issue?

It is common to experience leaking when using the columns, even when the plug is pushed in very tightly. We recommend wrapping the plug with parafilm to prevent leaking.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

With my ChIP assay (Agarose ChIP Kit/Magnetic ChIP Kit), the qPCR signal (cycle threshold) from my positive and negative controls show no difference or are very close. Why is this?

-Verify that your specific antibody (if not using the kit-provided RNA polymerase II antibody) is validated for IP. Ideally, a ChIP validated antibody is the best, but an antibody for IP has a good chance of working in ChIP.
-Ensure that your chromatin is properly digested (see Appendix A in the manual). Too much digestion as well as too little digestion will affect the success of the ChIP reaction.
-Ensure that all the chromatin has been released from the nuclei. When following the Magnetic ChIP kit instructions, MNase digestion of 4x106 cells followed by sonication to lyse the nuclei, yields about 20-50 µg for the IP. This same sequence can be used with the Agarose ChIP Kit as well. It is recommended that you start with 2–4 x 106 cells per ChIP reaction. Once a successful ChIP has been run at this cell number, it is possible to decrease the cell amount empirically. We have seen good results using as little at 10,000 cells, but this entirely depends on the cell line, target, and antibody.
-Ensure that enough DNA was used for qPCR. Typically, 30-80 ng of DNA is a good range.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the experimental IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient amount of sample DNA added to the PCR reaction: Add more sample DNA to the PCR reaction.
- Insufficient amount of antibody added to the IP: Add more antibody to the IP.
- Antibody did not function in an IP: Verify that the antibody is qualified for CHIP or IP applications and has been handled and stored properly.

Note: Increasing the stringency of the nuclear lysis is not recommended unless there is no signal or low signal-to-noise in the IP. Excess sample can result in high background decreasing the signal of the specific signal.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause PCR signal of the positive and negative control IP samples to be equivalent?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient washing of the IP complex: Include an additional wash with Buffers 2 and 3.
- Excess chromatin or antibody added to the IP: Add less chromatin or antibody.
- PCR amplification was measured outside the linear range of amplification: Decrease the number of amplification cycles used in the PCR reaction.

With my Agarose ChIP Kit, what can cause no or low PCR signal in the positive control IP samples?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient chromatin amount in the IP reaction: Use at least 25 µg of chromatin for each IP.
- Insufficient antibody incubation time: Incubate antibody overnight.
- Incomplete elution from the Protein A/G agarose resin: Perform elution at 65 degrees C and increase frequency of mixing.