M-MLV Reverse Transcriptase (200 U/μL)
M-MLV Reverse Transcriptase (200 U/μL)
Citations & References (4)
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M-MLV Reverse Transcriptase (200 U/μL)

M-MLV Reverse Transcriptaseは、ファーストストランドRNA、DNA、または RNA：DNAハイブリッドから相補的なDNA鎖を合成する組み換え DNAポリメラーゼです。AMV RTと比較すると詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）反応数
28025013200反応
280250211000反応
製品番号（カタログ番号） 28025013
価格（JPY）
68,200
Each
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反応数:
200反応
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M-MLV Reverse Transcriptaseは、ファーストストランドRNA、DNA、または RNA：DNAハイブリッドから相補的なDNA鎖を合成する組み換え DNAポリメラーゼです。AMV RTと比較すると、モロニーマウス白血病ウイルス逆転写酵素（M-MLV RT）は、DNAエンドヌクレアーゼ活性を持たず、RNase H 活性は低くなります。この酵素の特長：

•熱安定性—37°℃で最適な活性を示します
• cDNAのサイズ—M-MLVは、7 kbまでの第一鎖cDNAを合成することができます
• アプリケーション—第一鎖cDNAの合成、プライマーの伸長、dsDNAのシーケンシング、cDNAライブラリ、 RT-PCR

ソース
プラスミド上でM-MLVのpoli遺伝子を発現している大腸菌から精製

性能および品質検査
SDS-PAGE純度、Endodedoxyribonuclease, exodedoxyribonuclease, リボヌクレアーゼアッセイ, およびcDNA生成物の収量と長さ

ユニット定義
M-MLV RTの1ユニットは、37°℃で10分の条件下で、ポリ（A）オリゴ（dT）25をテンプレートプライマーとして、1 nmoleのデオキシリボヌクレアーゼを酸沈降物に組み込むために必要な酵素の量です。

最適な反応条件
50 mM Tris-HCl（pH 8.3）、40 mM KCl、6 mM MgCl2、1 mM DTT、0.5 mM [3H]dTTP、0.1 mM poly（A）、0.1 mM オリゴ（dT）25、0.1 mg/mL BSA、および50 µLの酵素（37°℃で10分間）
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
最終産物タイプcDNA（ファーストストランド）
フォーマットスタンドアローン酵素
反応数200反応
最適反応温度37℃
数量200反応、40,000ユニット
反応形態分離コンポーネント
試薬タイプ逆転写反応試薬
逆転写酵素M-MLV
リボヌクレアーゼH活性可
出荷条件湿氷
サイズ（最終製品）7 kb以下
原料RNA
技術Reverse Transcription
濃度200 U/μL
反応速度スタンダード
Unit SizeEach
組成および保存条件
内容：
• M-MLV RT（200 U/µL）1 × 200 µL
• 5Xファーストストランドバッファー[250 mMトリス-HCl（pH 8.3）、375 mM KCl、15 mM塩化マグネシウム]1 mL
• 100 mM DTT、500 µL

-20℃で保存。

よくあるご質問（FAQ）

ABI PRISM 7000　および Applied Biosystems 7300、7500、7500、7900HT SystemのSDS ソフトウェアでは、"Relative Quantification Plate Assay（ddCt)”を指定した場合、なぜ"ADD DISSOCIATION CURVE"ボタンが無効になってしまうのですか?

旧バージョンのソフトウェアでは、Relative Quantification Plate(⊿⊿Ct）アッセイを行う場合、同一ファイル中に融解曲線を設定することができません。ただし最近の機種や、7500/7500fastの最新のsofware( ver.2.0.5)では、サイクルステージの直後にmelt curve(融解曲線）が設定可能となっています。 なお旧バージョンのソフトウェアの場合は、Relative Quantification Plate(⊿⊿Ct）アッセイを行った後に、新しいRunファイルを作成し、融解曲線のみのプログラムでRunを行ってください。 融解曲線のみのRunを行う場合、"File"から "New"を選択します。展開された" New Document Wizard"画面中の"Assay"のプルダウンメニューから"DISSOCIATION"を選択し、融解曲線のみのRunを行ってください。この場合、解析ファイルとは別に融解曲線のみのSDSファイルが作成されます。

How much of the first-strand cDNA reaction should I load for PCR?

While the volume is dependent on the starting amount of RNA used for the first-strand synthesis and the abundance of the target gene, we'd recommend starting with 10% of the first-strand reaction for your PCR reaction.

How can reverse transcriptases be inactivated?

The enzymes can be inactivated by adding a chelating agent such as EDTA. Alternatively, with the exception of ThermoScript RT and Thermo-X RT, the enzymes can be heat inactivated at 70 degrees C for 10 min.

ThermoScript RT should be heated to 85 degrees C for 5 min for complete inactivation.

For Thermo-X RT, if using an oligo(dT) primer, add EDTA to the reaction at a final concentration of 5 mM. Inactivate the reaction by heating at 90 degrees C for 5 min.

What is the highest temperature that SuperScript III , SuperScript II, MMLV, or ThermoScript can be used?

The optimal temperature for SuperScript III RT is 50 degrees C, and can be used up to 55 degrees C. For some qRT-PCR reactions where gene-specific primers are used, you can do the RT reaction at 60 degrees C. The optimal temperature for SuperScript II RT is 42 degrees C, and can be used up to 50 degrees C. Optimal temperature for MMLV is 42 degrees C. ThermoScript RT shows optimal activity at 60 degrees C, and can be used at temperatures as high as 70 degrees C (for amplicons expected to be 1 kb or less). For PCR products expected to be greater than 1 kb, a maximum first strand synthesis temperature of 60-65 degrees C is suggested. Be sure your first-strand primer anneals at the high temperature, especially when gene-specific primers are used for high-temperature stable reverse transcriptases. We recommend oligo (dT)20 for cDNA synthesis when using an oligo (dT) primer for first-strand synthesis with these enzymes.

Can I use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase (Cat. No. 28025013, 28025021)? Can other reverse transcriptases, such as SuperScript reverse transcriptase, be used in the same way?

Yes, you can use a DNA-RNA hybrid as a template for M-MLV Reverse Transcriptase.

We have not tested this for SuperScript reverse transcriptases, so we cannot guarantee it would also work with those products.

This article can be used as a reference for additional information.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Reverse Transcription and RACE Support Center.

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引用および参考文献 (4)

引用および参考文献
Abstract
Raloxifene Upregulated Mesangial Cell MMP-2 Activity via ER-ß Through Transcriptional Regulation.
Authors:Fang M, Wu XC, Huang W,
Journal:Cell Biochem Biophys
PubMed ID:23471663
'Raloxifene, a second-generation selective estrogen receptor modulator, exerts estrogen-like effects in specific tissues. In this present study, we examined the effect of raloxifene on mesangial cell matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) activity in streptozotocin-induced diabetic mice. Raloxifene increased the MMP-2 level in a dose-dependent and receptor-mediated manner. An antibody against estrogen receptor-ß ... More
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Authors:Malnic B,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:23585038
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