TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ Kit
TaqMan&trade; MicroRNA Cells-to-C<sub>T</sub>&trade; Kit
Invitrogen™

TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™ Kit

Green features
Ambion™ TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットを使用することで、RNAを精製することなく、培養細胞から直接microRNA（miRNA）発現プロファイリングを実施できます。本キットは少数のサンプルからmiRNA発現解析を行うシンプルで完全なワークフローを提供する初めての製品であると同時に、自動化されたハイスループットのアプリケーションに簡単に組み込むこともできます詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
4391848100 reactions
製品番号（カタログ番号） 4391848
価格（JPY）
284,100
Each
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数量:
100 reactions
Ambion™ TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットを使用することで、RNAを精製することなく、培養細胞から直接microRNA（miRNA）発現プロファイリングを実施できます。本キットは少数のサンプルからmiRNA発現解析を行うシンプルで完全なワークフローを提供する初めての製品であると同時に、自動化されたハイスループットのアプリケーションに簡単に組み込むこともできます。

•完全で検証済みのソリューション—最適化されたワークフローには、細胞溶解試薬、DNase、TaqMan™ MicroRNA RT試薬、およびTaqMan™ユニバーサルPCRマスターミックスが含まれます
• 素早い、簡便、便利—サンプル調製は10分で完了し、面倒なRNA単離が不要
• Gold標準特異性—TaqMan™ MicroRNA試薬で優秀な結果を達成
• 安定した性能—精製RNAと同等の結果
• 広い入力ダイナミックレンジ—10～100,000細胞の線形検出

完全な検証済み溶液

TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットには、リアルタイムPCR解析用のTaqMan™ MicroRNA逆転写（RT）試薬およびTaqMan™ユニバーサルPCRマスターミックスが含まれ、ゲノムDNAを除去し、RNAの完全性を維持しながら培養細胞を溶解する独自の方法を特徴とする検証済みのソリューションです。TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットは、別売りのTaqMan™ MicroRNAアッセイを用いて広範な試験および検証が行われています。

シンプルで使いやすい10分間のサンプル調製

TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットには、10分間のシンプルなサンプル調製手順（図1）が付属し、プレートまたはチューブ内で10～100,000個の培養細胞⁄サンプルに対応しています。細胞をPBSで洗浄後、室温にて8分間で溶解します。同時にDNase処理も可能です。溶解は室温にて停止液を用い、2分間のインキュベーションで終了します。

TaqMan™MicroRNA Cells-to-CT™キットのライセートは、逆転写に使用できる状態になっています。保管の場合、-20℃で最大5か月まで可能です。サンプルは特定のRNA精製プロセスを対象としていないので、すべての小型RNA種の解析に使用できます。サンプルは培養プレート（96または384ウェル）で直接処理できるため、サンプル処理が低減され、サンプルの損失や移送エラーのリスクが最小限に抑えられます。加熱、洗浄、または遠心分離は必要ありません。このキットは、時間と労力を要する従来のプロセスを大幅に簡素化し、10分に短縮しました。

Gold Standard特異性—TaqMan™ MicroRNA試薬

Applied Biosystemsでは、成熟miRNAの短鎖に関連する根本的な問題に対する最先端のソリューションを開発しました。TaqMan™ MicroRNAアッセイ（別売）には、ターゲットに特異的な独自の幹ループ逆転写プライマーが含まれています（図2）。幹ループ構造は、サンプル中のすべてのRNAを無差別に拡張およびプライミングする他の方法とは対照的に、標的の成熟miRNAの特異性を組み込むように設計されています。TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットに含まれているTaqMan™ MicroRNA RT試薬は、この革新的なアッセイデザインと組み合わせて使用できるよう特別に設計されています。

正確なmiRNA発現解析を行うには、高相同性の成熟miRNAのターゲット同士間を区別する機能が必要です。TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キット は、TaqMan™ MicroRNAアッセイと組み合わせることで、図3に示すように、相同性の高いターゲット同士間を区別するために必要な特異性を提供します。この例では、™TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CTキット中の、または精製miRNAのライセートを、TaqMan™ MicroRNAアッセイを使用するリアルタイムPCRで使用し、外部添加したmiRNAテンプレート上の単一塩基の差異を検出しています。TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットライセート（図3A）で得られた特異性は、精製RNAを用いた場合と同程度でした（図3B）。

頑強な性能—精製RNAと同等の結果

この新しいキットは、TaqMan™ MicroRNAアッセイの幅広い選択肢から広範に検証されており、精製RNAと同等の性能を示すことがわかっています（図4）。TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットワークフローは、>900種類のTaqMan™ MicroRNAアッセイによる卓越したmiRNA発現評価を可能にします。

幅広い入力ダイナミックレンジ—10～100,000の細胞による直線性検出

miRNA発現レベルはサンプルの種類、発生段階、疾患の進行などにより大きく異なるため、miRNA発現解析用の高感度ツールを用いることがきわめて重要となります。現在では、数コピーから数百万コピーにいたるまでさまざまなmiRNAターゲットを、同一実験で正確に定量することが可能となりました。

TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットは、わずか10から最大で100,000までの細胞数を用いることで頑強な機能性を示します。さらに、TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットでは、感度を最大化するために、RT反応液量の最大33%をサンプルライセート（シングルプレックスRT）で構成することが可能です。図5は、TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットライセートによる検出の直線性と感度を、溶解反応あたり5 logの細胞インプット量で示しています；精製RNAに相当する結果が得られています。さらに、TaqMan™ MicroRNAアッセイの幅広いダイナミックレンジは、TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットライセートによる影響を受けません（データは非表示）。

実証済みの性能

TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットのコンポーネントは、いずれも一貫した信頼性の高い性能が得られるように最適化されています。これにより、個々のサンプル調製、逆転写、およびリアルタイムPCR用のキットを組み合わせる際の勘に頼る作業はなくなります。品質保証を強化するため、TaqMan™ MicroRNA Cells-to-CT™キットはTaqMan™ MicroRNAアッセイを用いて検証されています。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
使用対象 (装置)7000 System, 7300 System, 7500 System, 7900HT System, Applied Biosystems StepOnePlus™ Fast Real-Time PCR System, StepOne™, 標準モード, StepOnePlus™, 標準モード, QuantStudio 6および7 Proシステム, QuantStudio 7 Flexシステム, QuantStudio 3および5システム, QuantStudio 12k Flexシステム, QuantStudio 6 Flexシステム
フォーマットチューブ
グリーン機能使用するリソースが少ないことから廃棄物が少なく、危険性も低減
反応数反応100回分
受動的参照色素ROX（プレミックス）
ポリメラーゼAmpliTaq Gold DNAポリメラーゼ
製品ラインAmbion、Cells-to-CT、TaqMan
製品タイプMicroRNA Cells-to-Cキット
数量100 reactions
逆転写酵素M-MLV
サンプルタイプ細胞
出荷条件ドライアイス
対応可能対象100反応
検出法プライマープローブ検出
使用対象（アプリケーション）miRNA analysis
GC-Rich PCR Performance高
PCR法2ステップRT-qPCR
反応速度スタンダード
Unit SizeEach
組成および保存条件
細胞溶解試薬、DNase、TaqMan™ MicroRNA RT試薬、およびTaqMan™ユニバーサルPCRマスターミックスが含まれます。
100サンプル調製rxn、100DNase rxn、100逆転写rxns
、および500の20 µL PCR rxn

よくあるご質問（FAQ）

I'm seeing PCR products in the minus-RT control after performing my Cells-to-CT experiment. What does this mean?

If PCR products are seen in the minus-RT control reaction, but not in the no-template control, it indicates that genomic DNA remains in the sample and that genomic DNA was amplified in real-time PCR. Please follow the suggestions below:

- Ensure the DNase I is mixed thoroughly into the Lysis Solution.
- Use fewer cells per lysis reaction.
- Lyse cells using Lysis Solution that is at room temperature, and make sure that the lysis reaction occurs at room temperature.
You can also try increasing the incubation time of the lysis reaction to 8 minutes and/or using Lysis Solution that has been warmed up to 25 degrees C for cell lysis.

I'm getting PCR products in the no-template PCR control when performing a Cells-to-CT experiment. What could cause this?

PCR products in the no-template PCR control indicate that the sample is contaminated with DNA. More stringent steps need to be taken to control contamination.

I'm getting no PCR product or unexpected PCR products after performing a Cells-to-CT experiment. What could be the cause of this?

Please review the following possibilities and suggestions:

- A problem with adding or mixing the Stop Solution: ensure that the Stop Solution was added directly to the lysate, as components of the Lysis Solution may inhibit RT-PCR if not fully inactivated.
- The RNA was degraded: keep cells in PBS on ice before starting the cell lysis procedure.
- RNase in the sample was not completely inactivated: Too many cells could have been used or too much PBS left on the cells, diluting the lysis solution.
- The lysates sat too long before going to room temperature: Do not allow lysates to sit longer than 20 minutes at room temperature once the Stop Solution has been added.
- The sample does not contain the target RNA: Verify that the procedure is working by using the XenoRNA Control in the sample. Also check that your PCR primers can amplify your target under the PCR conditions you are using.

I ran out of stop solution for my Cells-to-CT experiment. Can I purchase it separately?

Yes, it is available in 1 mL aliquots (Cat. No. 4402960).

I have genomic DNA contamination in my Cells-to-CT reaction. How do I get rid of it?

1. Ensure that all medium is removed from the wells.
2. Wash with an equal volume of room temperature 1X PBS after the medium is removed.
3. Ensure that the reaction happens at room temperature (the lysis reaction may not reach room temperature if the plate is on ice, if the plate was quickly moved to the bench, or if a cold lysis solution was added).
4. Warm lysis solution to room temperature before adding to cells.
5. Allow the lysis reaction to proceed for 8 minutes at 25 degrees C.

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