cAMP-Screen Direct™ Cyclic AMP Immunoassay System

cAMP-Screen Direct™ 96-well Cyclic AMP Immunoassay Systemは、細胞ライセート中のサイクリックAMP（cAMP）濃度の超高感度測定を可能にします。この競合化学発光イムノアッセイは、手動での試薬添加、またはや自動ハイスループット処理を可能にする最大限の柔軟性を備えたフォーマットになっています。cAMPアッセイは、高感度な化学発光CSPD™基質とSapphire-II™エンハンサーを使用しています。これは、アルカリホスファターゼに結合したcAMP（cAMP-AP）で構成される酵素コンジュゲートによって誘発されます。化学発光基質／エンハンサー製剤はすぐに使用可能な試薬で、添加から30分で持続的なグロー発光を生成します。このアッセイは、高い感度と偽陽性がないことが不可欠な二次スクリーニングや臨床前研究で主に使用されます。

•市販されているcAMPアッセイの中で最高レベルの感度
• 数時間にわたり読み取りが可能で、シグナルの劣化がほとんどまたはまったくなし
• アッセイプレート上で直接増殖した細胞を使用するシンプルなプロトコル
• 幅広い受容体活性化研究に有用

高感度かつ長時間の安定したグロー時間
この化学発光アッセイは、市販のcAMPアッセイの中で最高レベルの感度を実現するよう設計されています。わずか60フェムトモルのcAMPを検出できます。このアッセイのダイナミックレンジは広く、0.06～6,000ピコモルのcAMPを検出でき、サンプル希釈やアセチル化などの操作は必要ありません。これは、GsGi結合作用剤または拮抗剤の刺激や阻害を測定する際に細胞ベースのアッセイで特に有用です。複製サンプルのアッセイ内精度は通常5%以下です。基質／エンハンサーの組成がグローシグナルに達すると、プレートを数時間にわたり読み取ることができ、シグナルの劣化はほとんど、またはまったくありません。これは、複数のプレートを互いに比較するスクリーニングに有用です。さらに、このアッセイの他のアデノシン含有または環状ヌクレオチドとの交差反応は非常に低く抑えられています。

受容体活性化研究用
cAMP-Screen Direct™システムは、受容体活性化の機能アッセイにおける細胞cAMPの定量用に設計されています。このアッセイは、内在性受容体によって機能測定するために確立された細胞株　リガンド受容体が細胞表面に外在性に発現した細胞株、初代細胞培養、および適切なリガンド処理に反応する組織で使用されています。また、受容体の特性評価、オーファン受容体リガンドの同定、新しいキメラ受容体の特性評価にも使用されています。このアッセイは、これらのシグナル伝達経路を刺激または干渉する化合物のハイスループットスクリーニングに使用できます。

シンプルなプロトコル — ライセートの移動は不要
アッセイはシンプルなプロトコルを使用しています。細胞をプレートに播種して培養し、目的の試験用化合物で処理します。細胞ライセートを培養培地あり、またはなしで調製します。ライセートを、コーティングされたマイクロプレート内で、cAMP-APコンジュゲートおよび抗cAMP抗体とともにインキュベーションします；その結果得られた免疫複合体はプレート中に捕獲されます。cAMPが存在しないサンプルでは、すべてのcAMP-APコンジュゲートは、コーティングされた表面で捕捉されるため、高いシグナルが生成されます。cAMPが存在する場合、非標識cAMPとの結合における競合の結果として捕捉されるCAM-APコンジュゲートの量が減少し、シグナルが低減します；シグナルの減少は細胞ライセートに存在するcAMPの量に比例します。洗浄して非結合cAMP-APを除去した後、化学発光基質を添加し、その結果得られたグローシグナルをルミノメーターで測定します。

このcAMP-Screen Direct™システムは、cAMP-Screen™システムと同じ利点をすべて備えていますが、細胞をマイクロプレートで直接増殖できるため、細胞ライセートを組織培養プレートからコーティング済みマイクロプレートに移動する必要はありません。これにより、１つ少ない転写ステップでより高いアッセイ精度が得られます。コーティング済みのマイクロプレート上では多くの異なる種類の細胞の培養に成功しており、その底面は透明であるため、細胞の観察が可能となります。

研究用途にのみ使用できます。ヒトまたは動物の治療もしくは診断目的には使用できません。