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Citations & References (3)
Invitrogen™
Single Cell-to-CT™ qRT-PCR Kit
Ambion Single Cell-to-CT™キットには、1–10個の細胞を含むサンプルの遺伝子発現分析のための完全に検証されたワークフローが含まれています。各キットには、サンプルの準備、逆転写、前増幅、およびqPCR用の試薬が含まれており、これらはシンプルなワークフローで最適化されており詳細を見る
製品番号（カタログ番号） 4458236
価格（JPY）お問い合わせください ›
1,465,000
Each
反応数:
反応400回分
Ambion Single Cell-to-CT™キットには、1–10個の細胞を含むサンプルの遺伝子発現分析のための完全に検証されたワークフローが含まれています。各キットには、サンプルの準備、逆転写、前増幅、およびqPCR用の試薬が含まれており、これらはシンプルなワークフローで最適化されており、わずか5ステップで完了できます（図を参照）。
製品の主な特長：
• 単一細胞からのリアルタイムRT-PCR用に事前に最適化されたワークフロー
• 最大感度での単一細胞の分析
• 他の方法に比べて優れた性能と再現性
• このキットの利便性と使いやすいプロトコル
最適化済みのプロトコルによる確実な成功と時間の節約
シンプルな7分間のサンプルの準備から各ワークフローを開始し、浄化の必要なしに、最小限の処理で効率的かつ再現性の高いダウンストリームRT-PCRに適合する溶液への細胞溶解を実現します。その後、逆転写にSuperscript™ RT、cDNAを増幅するTaqMan™ PreAmpマスターミックス、qPCR用のTaqMan遺伝子発現マスターミックスを使用します。これらの4つのステップはすべて、最高の感度を実現するように開発されています。手順全体を通して細胞サンプル全体が同じウェル内に維持されるため、感度に影響を与える可能性のある貴重な限られた物質のサンプル損失や希釈が発生しません。
シングルセルの感度 リアルタイムPCRの結果の感度は、サンプルの準備、逆転写、または増幅の効率に影響される可能性があります。Single Cell-to-CTキットは、このような潜在的な問題領域に対処し、最大限の感度で単一細胞から信頼性と堅牢性の高い遺伝子発現分析を可能にする溶液を作成します。Single Cell-to-CTキットを使用した単一細胞の同等物の検出は、優れた技術的再現性を備えた100個の細胞サンプルコントロールと比較して、qPCR結果の適切な直線性と感度を示します(図を参照）。個々の単一細胞は生物学的不均質性により予想通りに大幅な変動を示します。さらに、cDNAの前増幅ステップを含めることで、リアルタイムPCRの前に目的のターゲットを正確に増幅します。この重要なステップは、バイアスなしの方法でシグナルを増幅し、限られたサンプルの分析能力を拡張します。前増幅を用いた96個の遺伝子パネルの精度とシグナルの増強を示します（図を参照）。
別の方法と比較して、優れた性能と再現性
有機溶媒、ガラス繊維フィルター、または磁気ビーズを使用した従来のサンプルの準備方法は、不完全なRNA沈殿、結合、および溶出によるサンプル損失のために、単一細胞解析には適していません。さらに、細胞の溶解に単純な煮沸を伴うほとんどの単一細胞自家醸造法では、内在性RNaseを不活性化して遺伝子発現プロファイルを安定化させることができず、gDNA汚染などのRNAおよび阻害剤のキャリーオーバーの化学的開裂が起こり、qRT-PCRのすべてのアプリケーションに影響を与える可能性があります。一方、Single Cell-to-CTキットは、従来の浄化や自家醸造の煮沸法と比較して、単一細胞の分析において優れた感度と再現性を示します(図を参照）。
製品の主な特長：
• 単一細胞からのリアルタイムRT-PCR用に事前に最適化されたワークフロー
• 最大感度での単一細胞の分析
• 他の方法に比べて優れた性能と再現性
• このキットの利便性と使いやすいプロトコル
最適化済みのプロトコルによる確実な成功と時間の節約
シンプルな7分間のサンプルの準備から各ワークフローを開始し、浄化の必要なしに、最小限の処理で効率的かつ再現性の高いダウンストリームRT-PCRに適合する溶液への細胞溶解を実現します。その後、逆転写にSuperscript™ RT、cDNAを増幅するTaqMan™ PreAmpマスターミックス、qPCR用のTaqMan遺伝子発現マスターミックスを使用します。これらの4つのステップはすべて、最高の感度を実現するように開発されています。手順全体を通して細胞サンプル全体が同じウェル内に維持されるため、感度に影響を与える可能性のある貴重な限られた物質のサンプル損失や希釈が発生しません。
シングルセルの感度 リアルタイムPCRの結果の感度は、サンプルの準備、逆転写、または増幅の効率に影響される可能性があります。Single Cell-to-CTキットは、このような潜在的な問題領域に対処し、最大限の感度で単一細胞から信頼性と堅牢性の高い遺伝子発現分析を可能にする溶液を作成します。Single Cell-to-CTキットを使用した単一細胞の同等物の検出は、優れた技術的再現性を備えた100個の細胞サンプルコントロールと比較して、qPCR結果の適切な直線性と感度を示します(図を参照）。個々の単一細胞は生物学的不均質性により予想通りに大幅な変動を示します。さらに、cDNAの前増幅ステップを含めることで、リアルタイムPCRの前に目的のターゲットを正確に増幅します。この重要なステップは、バイアスなしの方法でシグナルを増幅し、限られたサンプルの分析能力を拡張します。前増幅を用いた96個の遺伝子パネルの精度とシグナルの増強を示します（図を参照）。
別の方法と比較して、優れた性能と再現性
有機溶媒、ガラス繊維フィルター、または磁気ビーズを使用した従来のサンプルの準備方法は、不完全なRNA沈殿、結合、および溶出によるサンプル損失のために、単一細胞解析には適していません。さらに、細胞の溶解に単純な煮沸を伴うほとんどの単一細胞自家醸造法では、内在性RNaseを不活性化して遺伝子発現プロファイルを安定化させることができず、gDNA汚染などのRNAおよび阻害剤のキャリーオーバーの化学的開裂が起こり、qRT-PCRのすべてのアプリケーションに影響を与える可能性があります。一方、Single Cell-to-CTキットは、従来の浄化や自家醸造の煮沸法と比較して、単一細胞の分析において優れた感度と再現性を示します(図を参照）。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
使用対象 (装置)7000システム、7300システム、7500システム、7900HT高速システム、7900HTシステム、GeneAmp 9700、GeneAmp™ 2400、StepOne™、高速モード、StepOne™、標準モード、StepOnePlus™、高速モード、StepOnePlus™、標準モード、Veritiサーマルサイクラー
グリーン機能使用するリソースが少ないことから廃棄物が少なく、危険性も低減
反応数反応400回分
製品ラインAmbion、Cells-to-CT
精製時間7 min.
数量400 reactions
サンプルタイプMammalian Cells
出荷条件ドライアイス
原料1-10 Cells
検出法TaqMan
使用対象（アプリケーション）RT-PCR
PCR法2ステップRT-qPCR
反応速度7 min.
Unit SizeEach
組成および保存条件
• Single Cell DNase I、400 µl
• Single Cell溶解液、4.0 mL（4℃で保管）
• Single Cell停止液、400 µl
• Single Cell SuperScript RT、600 µl™ RT
• TaqMan™遺伝子発現マスターミックス、50 mL（4℃で保管）
• Single Cell Pre-Ampミックス、2.1 mL
• Single Cell VILO™ RTミックス、1.2 mL
キットのコンポーネントは-20℃で保管してください。ただし、Single Cell停止液およびTaqMan™遺伝子発現マスターミックスは4℃で保管する必要があります。
• Single Cell溶解液、4.0 mL（4℃で保管）
• Single Cell停止液、400 µl
• Single Cell SuperScript RT、600 µl™ RT
• TaqMan™遺伝子発現マスターミックス、50 mL（4℃で保管）
• Single Cell Pre-Ampミックス、2.1 mL
• Single Cell VILO™ RTミックス、1.2 mL
キットのコンポーネントは-20℃で保管してください。ただし、Single Cell停止液およびTaqMan™遺伝子発現マスターミックスは4℃で保管する必要があります。
よくあるご質問（FAQ）
What can I do to improve the sensitivity of my qPCR assay?
Would the direct lysis approach to DNA/RNA analysis be a good alternative for very small samples?
Will the Cells-to-CT system work with my special cell line?
With the Single Cell-to-CT Kit, do samples need to be frozen immediately?
For single-cell analysis using the Single Cell-to-CT Kit, do I need to normalize my data?
引用および参考文献 (3)
引用および参考文献
Abstract
Single cell gene expression analysis of pluripotent stem cells.
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:23546759
Analyzing gene expression profiles from cells en masse provides an average profile for the population which may obscure differences in individual cells. Using an optimized workflow for qRT-PCR, gene expression profiles of undifferentiated pluripotent stem cells reveal distinct gene expression profiles for individual cells, and a large expression level range
Toll-like receptor 4 engagement drives differentiation of human and murine dendritic cells from a pro- into an anti-inflammatory mode.
Journal:PLoS One
PubMed ID:23408948
The dendritic cell (DC) coordinates innate and adaptive immunity to fight infections and cancer. Our observations reveal that DCs exposed to the microbial danger signal lipopolysaccharide (LPS) in the presence of interferon-? (IFN-?) acquire a continuously changing activation/maturation phenotype. The DCs' initial mode of action is pro-inflammatory via up-regulation among
Interleukin-10 inhibits angiotensin II-induced decrease in neuronal potassium current.
Journal:Am J Physiol Cell Physiol
PubMed ID:23426971
Previously we demonstrated that viral-mediated increased expression of the anti-inflammatory cytokine interleukin-10 within the paraventricular nucleus of the hypothalamus significantly reduces blood pressure in normal rats made hypertensive by infusion of angiotensin II. However, the exact cellular locus of this interleukin-10 action within the paraventricular nucleus is unknown. In the