Pierce™ Conjugate Purification Kit

Thermo Scientific Pierce Conjugate Purification Kitは、標識後に非反応酵素からの西洋ワサビペルオキシダーゼ（HRP）またはアルカリホスファターゼ（AP）結合抗体を精製するための穏やかなアフィニティークロマトグラフィーシステムです。

Conjugate Purification Kitの特長は以下のとおりです。

•IgGに特異的—手順はHRPまたはAP酵素をIgG抗体から除去するように作成されており、IgM、IgY、Fabフラグメントまたはストレプトアビジン複合体との使用は対象ではありまん
• 完全なキット—アフィニティカラム、活性化バッファー、溶出バッファー、脱塩カラム、および保管バッファー（HRP複合体およびAP複合体用）が含まれています
• 高キャパシティー—シングルユースのカラムキットは、Tris緩衝生理食塩水に溶解された0.5～50 mgの抗体複合体の精製用に設計されています
• アッセイの改良—非抱合酵素を抗体複合体から除去することで、バックグラウンドが軽減され、免疫測定法の全体的な性能が高まることがよくあります

この複合体精製キットは、抗体酵素結合反応を行った後、過剰な非抱合HRPまたはAlk-Phos酵素を標識された抗体（IgG）から除去するように設計されています。金属キレートアガロースレジンのカラムは、IgG酵素複合体に結合しますが、非共役酵素（HRPまたはAP）は通過させることができます。穏やかな非変性溶出バッファーにより、完全に活性化しているIgG-HRPまたはIgG-AP複合体が回収されます。付属の脱塩カラムによって、精製された複合体が任意のバッファーに交換され、さまざまな免疫検出法ですぐに使用できるようになります。

このキットの手順では、ニッケルキレートアガロースが、Cγ2およびCγ3ドメインの接合点でFc領域のヒスチジンリッチなクラスターを介してIgGと結合します。これは、すべての哺乳類IgGにわたり、高度に保存されます。ヒツジ、マウス、ヤギ、ラット、ウサギから精製したIgGは、ニッケルキレートレジンに結合します。アビジンまたはストレプトアビジン酵素複合体は、ニッケルキレートアガロースに結合しないため、この方法では精製できません。また、他の血清タンパク質もニッケルカラムに結合するため、このキットは血清からの抗体の精製には使用できません。

このキットを使用して非共役酵素を除去すると、アッセイ結果が向上します。システムに遊離酵素がシステムに存在しなければ、アッセイ感度の向上、洗浄時間とインキュベーション時間の短縮、および高いシグナル／ノイズ比をより簡単に実現できます。さらに、このカラムはサンプルを濃縮するため、希釈溶液中で複合体を使用する際にアッセイの最適化を容易に行えます。