Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencing, without competent cells

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit for Sequencingは、プルーフリーディングポリメラーゼで増幅された、平滑末端PCR産物をシーケンシング用のプラスミドベクターに直接挿入するための、効率の高い5分間のクローニング反応を提供します。各キットは、特別にデザインされたシーケンシングプライマー部位を持つpCR™4Blunt-TOPO™ベクターを使用しており、各反応からより多くのインサート配列とより少ないベクター配列を戻すことができます。これらのキットには、ご希望のPCRフラグメントを含む組み換えベクターのクローニングおよび選択に必要なツールが含まれています。

•迅速で簡単—5分間のクローニング反応を含め、わずか3ステップでPCRからクローンへと移行します。
•効率的—正しいインサートにより最大95％のクローンが得られます。
•実証済み—20,000回以上の引用により10年以上にわたって信頼性の高い性能を実現しています。
•シンプル—リガーゼ、PCR後の手順、または特定の配列を含むPCRプライマーは必要ありません。
•正確—忠実度の高いDNAポリメラーゼで使用するため、PCR産物のA-オーバーハングは必要ありません。

pCR™4Blunt-TOPO™ベクター—シーケンス用に最適化されています。
pCR™4Blunt-TOPO™ベクターは、最小化されたマルチクローニングサイトを持っているため、シーケンシングプライマーサイトとインサートサイトの間の距離が短くなります（わずか33 bp）。それで、シーケンシング反応ではベクター配列が少なくなりインサート配列が多くなります。pCR™4Blunt TOPO™ベクターには、一般的なシーケンシングプライマー用の部位として、M13フォワード、M13リバース、T7、T3の4つが含まれています。このキットには、それぞれのアリコートが含まれています。

pCR™4Blunt-TOPO™クローンの選択と操作
pCR™4Blunt-TOPO™ベクターには、アンピシリンとカナマイシンの両方の耐性マーカーと、ポジティブセレクションのためのLacZα-ccdB遺伝子融合が含まれています。ベクターの最小化されたマルチクローニングサイトには、クローニングされたPCR産物の簡易的な切除のための隣接EcoRI部位と、シーケンシング前にネストされた欠失を生成するための独自のSse8387I部位がまだ含まれています。in vitro転写向けのT7およびT3プロモーターも用意されています。

簡略化されたTOPO™ベースのクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の手順、ベクターの調製、その他の時間のかかるDNA操作ステップは不要になります。提供さ れたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接 PCR 反応を加え、5 分間インキュベートして E. coli コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大 95 % まで使用することで、スクリーニングするクローンの数を減らすことができ、時間とコストを節約できます。PCR™4Blun-TOPO™ ベクターはオーバーハングを生じさせず、平滑端末 PCR 産物を残す耐熱性ポリメラーゼの校正により作成された PCR 産物を効率的にライゲーションします。


最も広く使用™ されているクローニングキットクローニングに関しては、TOPO クローニング技術が 10 年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

きっとオプション：シーケンシング用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキット
シーケンシング用Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供するさまざまなコンピテントセルと共にご購入いただけます。
• 一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号K2875-J10、K2875-20、K2875-40）
• 高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号K2880-20、K2880-40）•一般クローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号K2895-20）•迅速な増殖：Mach1™-T1R化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号K2835-20）• お客様の細胞を提供します（カタログ番号450031、450159）