Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, without competent cells
Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, without competent cells
Citations & References (2)
Invitrogen™

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kit, without competent cells

Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するための、高効率な5分間ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットには、ポジティブセレクション用のccdB遺伝子を含むZero詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
45024525反応
45124510反応
製品番号（カタログ番号） 450245
価格（JPY）
93,600
Each
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数量:
25反応
Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキットは、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するための、高効率な5分間ワンステップクローニング戦略（「TOPO™クローニング」）を提供します。各キットには、ポジティブセレクション用のccdB遺伝子を含むZero Blunt™ TOPO™ ベクター（図を参照）が含まれており、組換え体によるプラスミドベクターの増殖のみが可能です。Zero™ Blunt™ TOPO™キットは、お客様のニーズと予算に応じて、さまざまなコンピテントセルを使用したものを、またはコンピテントセルなしでご利用いただけます。Zero™ Blunt™ TOPO™ PCR クローニングキットの特長：

迅速かつ簡単—PCRからクローンまでわずか3ステップ、わずか5分のハンズオンタイムで行えます
効率的—正しいインサートを使用して、最大95％のクローンを生成できます
実績—4,000件を超える引用が裏づけるとおり、10年以上にわたり信頼性の高いパフォーマンスを発揮しています
シンプル—リガーゼ、PCR後の処理、特定の配列を含むPCRプライマーは不要です

Zero Blunt™ TOPO™ クローニングキット—概要

ベクター：pCR™Blunt II-TOPO™ ベクター—ccdB遺伝子が含まれており、組換え体の直接選択が可能です

クローニング法：TOPO™クローニング—トポイソメラーゼIベースの、プルーフリーディング耐熱性ポリメラーゼで増幅された平滑末端PCR産物の5分間ライゲーション

コンピテントセル：各種オプション—一般的で高効率なバクテリオファージT1-耐性の、急速に増殖するコンピテントセルを備えたキットから選択するか、ユーザー独自のキットを使用できます。

pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクター—プルーフリーディングポリメラーゼ用
pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターは、Platinum™ PfxDNAポリメラーゼなどの耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成された平滑末端PCR産物をクローニングします。pCR™ Blunt II-TOPO™ ベクターには以下が含まれます。

•挿入配列を簡単に切り出すための、PCR生成物挿入部位に隣接したEcoRI部位
•大腸菌での選別用にカナマイシンおよびZeocin™耐性遺伝子の選択が可能
•in vitro RNA転写とシーケンシング用のSP6プロモーター／プライマー領域
•シーケンシングまたはPCRスクリーニング用のM13フォワードおよびリバースプライマー領域

pCR™Blunt II-TOPO™クローンの選択
pCR™-Blunt II-TOPO™ は、致死的な大腸菌遺伝子ccdBの破壊を介して、組換え体を直接選択できます。ベクターには、LacZαフラグメントのC-末端に融合したccdB遺伝子が含まれています。平滑末端PCR産物のライゲーションは、LacZα-ccdB遺伝子融合の発現を阻害し、形質転換時に陽性組み換え体のみを増殖させます。非組換えベクターを含む細胞はプレーティング時に死滅します。そのため、青／白スクリーニングは不要です。

TOPO™ ベースの簡単なクローニング
TOPO™クローニング技術を使用すると、特定の配列を含むPCRプライマー、PCR後の処理、ベクター調製、その他の時間のかかるDNA操作手順は必要ありません。提供されたトポイソメラーゼ荷電ベクターに直接PCR反応を加え、5分間インキュベートして大腸菌コンピテントセルを形質転換するだけです。

効率的なクローニング
目的のインサートを持つクローンを最大95%まで使用することで、スクリーニングするクローンの数を減らし、時間とコストを節約できます。このキットで使用されるpCR™ Blunt II-TOPO™ベクターには致死的なccdB遺伝子が含まれており、耐熱性プルーフリーディングポリメラーゼによって生成される平滑末端PCR組換え体製品を効率的に選択できます。

クローニングの標準製品
TOPO™クローニング技術は、10年以上にわたり数千人の科学者にとって信頼できるパートナーとなっています。高速で使いやすく、効率的なTOPO™クローニングは、さまざまなアプリケーションのために多くの異なるベクターに適用されています。

Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning™ Kitのオプション
Zero Blunt™ TOPO™ PCR Cloning Kitは、平滑末端PCR産物をプラスミドベクターに直接挿入するためのキットであり、さまざまなコンピテントセルとともに購入できます。これらのコンピテントセルは、お客様のニーズに応じてさまざまな利点を提供します：

一般的なクローニング：TOP10細胞（カタログ番号：K2800-20、K2800-40）
高効率のクローニング：TOP10 Electrocomp™細胞（カタログ番号：K2860-01、K2860-40）
一般的なクローニング、バクテリオファージT1耐性：DH5α-T1R（カタログ番号 K2820-20、K2820-40）
迅速な増殖：Mach1™-T1Rの化学的コンピテント大腸菌（カタログ番号：K2830-20）
自作のコンピテントセルを使用：柔軟性を高めながらコスト削減が可能（カタログ番号450254）

当社は、当社は、クリーンでシーケンス対応の組み換えプラスミドの分離に使用するためのPureLink™ Quick Plasmid Miniprep Kit（カタログ（前の文節に統合）
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
抗生物質耐性菌カナマイシン（KanR）、Zeocin™（ZeoR）
菌株または酵母株含まれない
クローニング法Blunt TOPO™
製品ラインTOPO、Zero Blunt
製品タイプPCRクローニングキット
プロモーターSP6
数量25反応
出荷条件ドライアイス
ベクターBlunt DNAクローニングベクター、TOPOクローニングベクター、pCR
フォーマットキット
Unit SizeEach
組成および保存条件
ボックス1：
•線状化およびトポイソメラーゼ I活性化pCR™Blunt II-TOPO™ベクター
• 塩溶液
• dNTP
•コントロールテンプレート
• M13フォワードおよびリバースプライマー
•滅菌水

-5～-30℃で保存してください。
すべての試薬は、適切に保存した場合、6ヶ月間安定です。

よくあるご質問（FAQ）

What is the difference between the pCR2.1-TOPO and pCR4-TOPO vectors?

The vector backbones for both of these vectors are very similar. The main difference is that the pCR4-TOPO vector has sequencing primer sites located as close as 33 base pairs from the PCR product insertion site. This minimizes the amount of vector DNA sequence that needs to be read before reaching the sequence of the insert, making the pCR4-TOPO vector very useful for sequencing applications.

What is the difference between the pCR2.1-TOPO and pCRII-TOPO vectors?

The vector backbones for both of these vectors are very similar. The main difference is that the pCRII-TOPO vector is a dual promoter vector, containing the SP6 and T7 promoters for in vitro transcription/sequencing, whereas the pCR2.1-TOPO vector contains only the T7 promoter for in vitro transcription/sequencing. Both vectors contain the M13 Forward and Reverse primer sites for sequencing or PCR screening.

Your TOPO cloning kits contain a control template and control primers. Can I obtain the sequence of the control template?

The sequence of the control template is proprietary.

I'm seeing a lot of vector-only colonies when I try to perform a negative control reaction using vector only (no insert) for a TOPO reaction. Is my TOPO vector re-ligating?

Using the vector only for transformation is not a recommended negative control. The process of TOPO-adaptation is not a 100% process, therefore, there will be “vector only” present in your mix, and colonies will be obtained.

I'm trying to clone in my phosphorylated PCR product into a TOPO vector, and I'm getting no colonies. However, when I clone the same product into a TA vector, everything works perfectly. Why is this?

Phosphorylated products can be TA cloned but not TOPO cloned. This is because the necessary phosphate group is contained within the topoisomerase-DNA intermediate complex of the vector. TOPO vectors have a 3' phosphate to which topoisomerase is covalently bound and a 5' phosphate. Non-TOPO linear vectors (TA and Blunt) have a 3' OH and a 5' phosphate. Phosphorylated products should be phosphatased (CIP) before TOPO cloning.

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引用および参考文献 (2)

引用および参考文献
Abstract
Cloning and expression of ntnD, encoding a novel NAD(P)(+)-independent 4-nitrobenzyl alcohol dehydrogenase from Pseudomonas sp. Strain TW3.
Authors:James KD, Hughes MA, Williams PA
Journal:J Bacteriol
PubMed ID:10809692
Pseudomonas sp. strain TW3 is able to metabolize 4-nitrotoluene to 4-nitrobenzoate and toluene to benzoate aerobically via a route analogous to the upper pathway of the TOL plasmids. We report the cloning and characterization of a benzyl alcohol dehydrogenase gene (ntnD) which encodes the enzyme for the catabolism of 4-nitrobenzyl ... More
Expression and characterization of a Bifidobacterium adolescentis beta-mannanase carrying mannan-binding and cell association motifs.
Authors:Kulcinskaja E, Rosengren A, Ibrahim R, Kolenová K, Stålbrand H
Journal:Appl Environ Microbiol
PubMed ID:23064345
The gene encoding ß-mannanase (EC 3.2.1.78) BaMan26A from the bacterium Bifidobacterium adolescentis (living in the human gut) was cloned and the gene product characterized. The enzyme was found to be modular and to contain a putative signal peptide. It possesses a catalytic module of the glycoside hydrolase family 26, a ... More