T7 Gene 6 Exonuclease

T7遺伝子6エクソヌクレアーゼは、DNAの約50%が酸可溶性になるまで、オリゴヌクレオチドとモノヌクレオチドを遊離することにより、5’ホスホチルまたは5’水酸基ヌクレオチドの両方から、5'→3'方向で二重DNAを非処理で加水分解します。また、5'末端の二本鎖DNAとRNA：DNAハイブリッドのRNAにおけるギャップとニックで、ヌクレオチドを5'→3'方向に分解します。

T7遺伝子6エクソヌクレアーゼは、5'末端の5'モノヌクレオチドを遊離した二重DNAの段階的加水分解を触媒する点で、ラムダエキソヌクレアーゼに似ています。しかし、ラムダエキソヌクレアーゼとは異なり、この酵素は処理能力が低く、5’水酸基と5’ホスホチルの両方の末端を除去します。

また、RNA：DNAハイブリッドのRNAとDNAを5'→3'方向に分解しますが、二本鎖または一本鎖RNAのいずれも分解できません。

この酵素は、シーケンシングまたはSNP解析用の一本鎖DNAテンプレートの生成に使用されています。

特性
分子量：32 kDa
最適pH：7.5
最適温度：37℃
不活性化：75℃で10分間、または50 µLの反応量に0.5 M EDTAを2 µL添加。

不活性化
75℃で10分間加熱、または50 µLの反応量に0.5 M EDTAを2 µL添加。

純度
SDS-PAGEで測定して95％を超える純度。エンドヌクレアーゼおよびリボヌクレアーゼの汚染試験済み。

保存バッファー
50 mM KPO₄（pH 6.5）、1 mM EDTA、1 mM DTT、50%グリセロール。

アッセイ条件
反応混合液（50 µL）には、50 mMトリス-HCI（pH 8.1）、5 mM MgCl₂、20 mM KCI、5 mM 2-メルカプトエタノール、二本鎖DNA、酵素が含まれます。インキュベーションは、37℃、15分間です。

ユニット定義
1ユニットは、標準的なアッセイ条件下で、37℃、15分間で1 nmolの酸可溶性ヌクレオチドを放出するために必要な酵素量です。

濃度
50ユニット/µL

由来
T7遺伝子6エキソヌクレアーゼの過剰産生クローンを含む大腸菌株

機能試験
37℃、30分間で75ユニットの酵素による0.5 pmolのλ DNAの一本鎖半分子への変換。アガロースゲル電気泳動による検証。

アプリケーション：
  1.5'末端からの二本鎖DNAの制御された段階的消化
  2.シーケンシングまたはSNP解析用のssDNAテンプレートの生成