Exonuclease VII

エキソヌクレアーゼVIIは、5'→3'および3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を有する厳格な一本鎖指向性酵素で、一本鎖特異性を持つ唯一の双方向エキソヌクレアーゼです。エキソヌクレアーゼVIIは、EDTAの存在下で完全に活性化されるため、二価陽イオンの明らかな要件はありません。初期反応生成物は、酸可溶性オリゴヌクレオチドで、さらに酸可溶性形態に加水分解されます。限定消化産物は、低分子量オリゴマー（二量体から十二量体）です。

特性：
分子量：xseAサブユニット = 51.8 kDa、xseBサブユニット = 8.8 kDa
最適温度：37℃
最適 pH：8.0
不活性化：95℃で10分間。

純度：
SDS-PAGEで測定して95％を超える純度。エンドヌクレアーゼ、二本鎖エキソヌクレアーゼ、リボヌクレアーゼの汚染試験済み。

保存バッファー：
50 mMトリス-HCl（pH 8.0）、200 mM NaCl、0.5 mM EDTA、10 mM DTT、50%グリセロール。

アッセイ条件：
反応（50 µL）には、50 mMトリス-HCl（pH 7.9）、50 mMリン酸カリウム（pH 7.6）、8.3 mM EDTA、10 mM 2-メルカプトエタノール、変性DNA、酵素が含まれます。

ユニット定義：
1ユニットは、標準的なアッセイ条件下で、37℃、30分間で1 nmolのヌクレオチドから酸可溶性ヌクレオチドへの変換を触媒するために必要な酵素量です。

濃度：
10ユニット/µL

由来：
エキソヌクレアーゼVIIの大きい（xseA）サブユニットと小さい（xseB）サブユニットの両方をコードする過剰産生クローンを含む大腸菌株。

プロトコル：典型的な反応条件（50 µL）
70 mMトリス-HCI、pH 8.0
8 mM EDTA
10 mM 2-メルカプトエタノール
1 µg DNA
50 µg/mL
0.2ユニットエキソヌクレアーゼVII

37℃で30分間インキュベートします。95℃で10分間加熱して酵素を不活性化します。エキソヌクレアーゼVIIはEDTAによって阻害されないことに注意してください。

注：エキソヌクレアーゼVIIで使用する一般的な希釈バッファーは、50 mMトリス、pH 7.9、1 mM DTT、および0.5 mg/mLアセチル化BSAです。

アプリケーション：
  1.ゲノムDNA内のイントロンの位置マッピング。
  2.ポリ（dA-T）テールを持つインサートからのベクターDNAの除去。
  3.過剰なPCRプライマーの除去。
  4.制限エンドヌクレアーゼによって生じる一本鎖オーバーハングの除去。