Poly(A) Polymerase, Yeast

ポリ（A）ポリメラーゼは、RNAの3'末端へのアデノシン残基の付加を触媒します。クローニングの最初のステップで、RNAにポリ（A）テールを付加するのに使用できます。反応には、Mn²⁺ またはMg²⁺、基質としてATP、プライマーとして3'ヒドロキシル末端を含む RNA が必要です。ATPのコルジセピン5’三リン酸（3'-dATP）への置換により、RNA末端に単一の3'-dA残基が付加されます。これは、3'末端でRNAを標識するための有用な手法です。

比較研究では、酵母ポリ（A）ポリメラーゼは、RNAオリゴヌクレオチド標識やポリ(A)テーリングのための E. coli ポリ(A)ポリメラーゼよりも効率的に作用します。酵母酵素のインキュベーション時間はより短くでき、長い基質も短い基質も両方を同等に標識することが確認されています。長鎖RNA分子の3'末端標識には、T4 RNAリガーゼよりもポリ（A）ポリメラーゼを推奨します。

*注：酵母ポリ（A）ポリメラーゼを使用して、さまざまな修飾ヌクレオチドを用いたRNAの3'末端の標識をすることもできます。

純度：
リボヌクレアーゼフリー

保存バッファー：
20 mMトリス-HCl（pH 8.0）、50 mM塩化カリウム、0.5 mM DTT、50%グリセロール。

アッセイ条件：
2 5 mMトリス-HCl（pH 7.0）、40 mM塩化カリウム、0.5 mM MnCl₂、0.05 mM EDTA、0.5 mM DTT、0.2 mg/mL BSA、10%グリセロール、3.3 µM放射性標識化ATP、0.5 mM ATP、6.5 µgポリ（A）（約100塩基）、ポリ（A）ポリメラーゼ。37℃で10分間インキュベーションした後、酸不溶性放射能を測定します。

ユニットの定義：
1ユニットは37℃で（リボA）15に組み込まれた15 pmol/minのAMPに相当します。

濃度：
600ユニット/µL

機能試験：
コルジセピン 5'三リン酸を持つリボヌクレオチドの3'末端標識。

機能試験済みの5Xポリ（A）ポリメラーゼ反応バッファー（1 mLを含む、PN74226）：
100 mM トリス-HCl、pH 7.0、3.0 mM MnCl₂、0.1 mM EDTA、1mM DTT、500 µg/mL アセチル化BSA、50%グリセロール。

アプリケーション：
  1.RNAへのポリ（A）テールの付加。
  2.RNAの3'末端の標識。

ソース：
酵母ポリ（A）ポリメラーゼの過剰産生クローンを含むE. Coli 株。