Poly(A) Tail-Length Assay Kit

効率向上のために新たに再構成されたキット：76455 1KT ポリ（A）テール長アッセイキットは、76450 1KTに直接交換できるキットです

• 一般的なラボ用機器を使用して、複数のRNAのポリ（A）テールを3時間以内に測定します
• 他のアッセイ（ノーザンブロッティングなど）と比較してポリ（A）テール長を正確に測定します
• 1 つのキットには、 5回のG/Iテーリング、20回のRT反応、および80回のPCR反応に最適化された試薬が含まれています

説明：
真核生物mRNAのポリアデニル化は、安定性、翻訳の強化、核輸送、miRNA媒介遺伝子制御など、RNA代謝において重要な役割を果たします。ポリ（A）テール長アッセイキットを使用すると、複数のmRNAのポリ（A）テールをわずか3時間で迅速に測定できます。このキットは、RNAの3'末端を保持し、ポリ（A）テール長の正確な測定を保証する新しいG/I伸長技術を利用しています。また、すべての反応成分が最適化されているため、高品質なデータを迅速に取得できます。

説明：
ポリ（A）テール長アッセイキットでは、ポリ（A）テール長測定を可能にする4つの重要なステップを使用します（図 1）。

ステップ1では、ポリ（A）ポリメラーゼが、ポリ（A）含有RNAの3’末端に、限られた数のグアノシン残基とイノシン残基を付加します。

ステップ2では、新たに付加されたG/Iテールをプライミング部位として使用して、テールを持つRNAを逆転写によりDNAに変換します。

ステップ3では、2つのプライマーセットを使用して、PCR増幅産物を生成します。ポリアデニル化部位の上流に設計された遺伝子特異的フォワードおよびリバースプライマーセット（3’-UTR など）は、目的遺伝子のコントロールとして生成されます。2番目のプライマーセットは、遺伝子特異的フォワードプライマーとキットに付属のユニバーサルリバースプライマーを使用して、目的遺伝子のポリ（A）テールを含む産物を生成します。

最後に、ステップ4では、PCR産物をアガロースゲルまたはポリアクリルアミドゲルで分離します（図2）。

キットの構成：
キットには、5回分のG/Iテーリング、20回分の逆転写、および80回分のPCR反応に必要な試薬がすべて含まれています。

参考文献：
Parker, R. and Song, H. (2004) NAT Strut Mol Biol.11 121～127.
Brodersen, D.E. et al.  （2008） Biochim Biophys Acta.1779, 532～537.
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Martin、G.およびKeller, W.（1998） RNA 4、226～230。
Gauss- Müller, V. et al.(2001) Nucleic Acids Res.29 E57-7