NE-PER™ Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents

Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kitは、2時間以内に効率的に細胞を溶解し、細胞質タンパク質と核タンパク質を別々に抽出します。

NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kitの特長：

•迅速—可溶性タンパク質の核および細胞質分画を2時間以内に取得
• 実証済み—NE-PER試薬キットは950を超える文献で引用
• 多用途–培養細胞または組織（新鮮サンプルのみが対象）から核タンパク質を抽出
• 拡張可能—細胞および組織からの抽出用に2つのキットサイズ
• 便利—手順は簡単で、勾配での超遠心分離は不要
• 適合性—ウェスタンブロッティング、ゲルシフトアッセイ、タンパク質アッセイ、レポーター遺伝子アッセイ、および酵素活性測定など、さまざまなダウンストリームアッセイに使用可能

NE-PERキットは、シンプルかつ段階的な細胞溶解工程と、核タンパク質および細胞質タンパク質分画を遠心分離する工程を含む核タンパク質抽出法です。必要なツールは、卓上型微量遠心分離機、チューブ、ピペットだけです。NE-PER試薬は、交差汚染や、ゲノムDNAおよびmRNAからの干渉を最小限に抑えながら、細胞質タンパク質と核タンパク質を効率的に可溶化して分離します。分離したタンパク質は、脱塩または希釈した後、移動度シフトアッセイ（EMSA）、免疫共沈降（Co-IP）、プルダウンアッセイなどのイムノアッセイやタンパク質相互作用実験に使用できます。

核を分離して核タンパク質抽出物を調製する方法は数多く存在します。核抽出物を調製する方法のほとんどはプロセスが長く、機械的ホモジナイゼーション、凍結融解サイクル、大がかりな遠心分離や透析ステップを必要とするため、核タンパク質の完全性を損う可能性があります。NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagent Kitは試薬ベースのプロトコルで、段階的に細胞を溶解し、インタクトな核から細胞質を分離して、ゲノムDNAやmRNAから核タンパク質を抽出します。この穏やかな手順は2時間以内に完了し、培養細胞を使用する場合は標準的な卓上遠心分離機しか必要ありません。さらに、活性核タンパク質と細胞質タンパク質の両方を、同じ細胞培養または組織サンプルから回収できます。

キットは一般的に、2百万個の細胞から200～500 µgの細胞質タンパク質、および100～200 µgの核タンパク質を（1 mg/mLの濃度で）抽出します。細胞質および核分画間の交差汚染は、通常約10%です。この方法は主に可溶性タンパク質を核から回収し、クロマチン中のタンパク質、または核膜の内在性膜タンパク質はそれほど多くは回収しません。核抽出物のタンパク質濃度は、抽出に使用する核抽出試薬（NER）の量を変えることで容易に調整可能で、抽出効率を大幅に損なうことはありません。細胞から核タンパク質を特異的に抽出することは、多くの遺伝子調節研究において成功の要です。核を分離して核タンパク質抽出物を調製する方法は数多く存在しますが、そのほとんどはプロセスが長く、機械的ホモジナイゼーション、凍結融解サイクル、大がかりな遠心分離や透析ステップを必要とするため、壊れやすい多くの核タンパク質の完全性を損う可能性があります。NE-PERキットはこれらの問題を克服し、EMSAやその他の分析技術に使用できる高品質の濃縮核タンパク質抽出物を提供します。

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