Apo-BrdU Apoptosis Detection Kit

APO-BRDU™キットは、フローサイトメトリーでアポトーシスを起こしている細胞を検出するためのDNA切断および全細胞DNAを標識化する2色の染色法です。このキットには、試薬の性能を評価するためのポジティブコントロール細胞やネガティブコントロール細胞、アッセイの個々のステップを処理するための洗浄バッファー、反応バッファー、すすぎバッファー、DNA切断の標識化用の末端デオキシヌクレオチド転位酵素（TdT）、ブロモデオキシウリジン三リン酸（BR-dUTP）、およびフルオレセイン標識抗BrdU抗体など、細胞のアポトーシス測定に必要なステップと試薬が含まれています。

アポトーシスを起こしている細胞の最も簡単に測定するための機能の1つは、細胞ヌクレアーゼによるゲノムDNAの分解です。これらのDNA断片はアポトーシスを起こしている細胞から抽出でき、アガロースゲル電気泳動でDNAを分析するときにDNAラダーが現れます。ほとんど無傷のままのアポトーシスを起こしていない細胞のDNAには、電気泳動中にアガロースゲル上にこのようなラダーが現れません。アポトーシスを起こしている細胞に現れるDNA断片の数が多いと、DNA内に大量の3'-ヒドロキシル末端が存在します。この特性は、3-ヒドロキシル末端をブロモ化デオキシウリジン三リン酸ヌクレオチド（BR-dUTP）で標識化することにより、アポトーシスを起こしている細胞を識別するために使用できます。末端デオキシヌクレオチド転位酵素（TdT）は、平滑、埋込型、またはオーバーハングのいずれかの末端を持つ二本鎖DNAまたは一本鎖DNAの3'-ヒドロキシル末端へのデオキシリボヌクレオシド三リン酸のテンプレートに依存しない添加を触媒します。これらの相当な数の部位をAPO-BRDU™キットで使用するメソッドの基礎となるアポトーシスを起こしている細胞で利用できます。最近のエビデンスでは、Br-dUTPは、フルオロセイン、ビオチン、ジゴキシゲニンなどの大きなリガンドに複合体化されたデオキシヌクレオチド三リン酸よりも、アポトーシスを起こしている細胞のゲノムに容易に取り込まれることが示されています。この優れた組み込みにより、Br-dUTP部位がフルオレセイン標識抗BrdUモノクローナル抗体によって識別されると、より明るいフローサイトメトリーシグナルが得られます。アポトーシスを起こしていない細胞では、3'-ヒドロキシルDNA末端が露出していないため、大量のBr-dUTPが取り込まれません。

70%（v/v）エタノール中1 mLにつき約1x10⁶細胞の5 mLのポジティブコントロール細胞懸濁液と5 mLのネガティブコントロール細胞懸濁液を含む合計60種類の細胞懸濁液を処理のに十分な試薬が提供されます。

アプリケーション
免疫細胞化学、フローサイトメトリー分析