Pierce™ Classic Magnetic IP/Co-IP Kit

Thermo Scientific Pierceクラシック磁気IP/Co-IPキットは、10 µg未満の抗体と磁気分離器を使用して、抗原およびタンパク質複合体の高効率な免疫沈降（IP）および共免疫沈降（co-IP）を可能にします。

クラシック磁気IP/Co-IPキットの特長：

•適合性—タンパク質A/G組換えタンパク質に基づく磁気ビーズは、マウスまたはウサギのいずれからでも、ほとんどの一次抗体との適合性を確保します
• 高速—わずか30分で免疫沈降し、バックグラウンドを低減し、一過性タンパク質複合体の捕捉を改善します
• 清浄—抗体を固定し、溶出物の汚染を防ぎます
• 耐性—界面活性剤、低pH緩衝液または一般的な質量分析溶媒が存在する場合でも、タンパク質A/Gの浸出を防止します
• 効率—他の磁気ビーズと比較すると、推奨される磁気粒子の半分の容量で免疫沈降できます
• 便利—包括的なCo-IPキットには磁気ビーズと免疫沈降実験を完了するために必要なすべてのバッファーが含まれています

この免疫沈降キットは、高品質のThermo Scientific Pierceタンパク質A/G磁気ビーズ、最適化されたバッファーおよび柔軟なプロトコルを使用して、手動または自動の磁気分離ツールで高収量のIPまたはco-IPを実現します。最適化された溶解／洗浄バッファーは、抗体-抗原およびco-IP相互作用の収率と効率的な結合を最適化します。比較的穏やかな低pH溶出バッファーは、結合した免疫複合体をタンパク質A/Gから分離しますあるいは、付属のレーンマーカーサンプルバッファーを使用すると、IP製品の直接SDS-PAGE分析用の迅速な変性溶出が可能です。

内容：
Pierceタンパク質A/G磁気ビーズ、溶解／洗浄バッファー、溶出バッファー、中和バッファー、サンプルローディングバッファー

磁気粒子による免疫沈降は、アガロースビーズによるIPとほぼ同じですが、遠心分離機ではなく磁気を使用して分離される点が異なります。特異的な抗体を最初にサンプルに添加して免疫複合体を形成し、その後磁気ビーズに結合します。複合体は洗浄されて非結合物質が除去され、低pH溶出バッファーは結合した免疫複合体をタンパク質A/Gから分離しますあるいは、変性条件を使用した分離や、SDS-PAGE分析用の下流サンプル調製用にレーンマーカーサンプルバッファーが含まれています。このキットには、抗原の迅速かつ簡便な磁気分離を実現するThermo Scientific Pierceタンパク質A/G磁気ビーズと、抗原収量を向上させるために最適化されたバッファーが含まれています。ビーズは、磁気スタンドを使用して溶液から手動で、またはThermo Scientific KingFisher Flexなどの装置を使用して自動で除去します。

一般的に、抗体サンプルのインキュベート時間が長く（2時間～一晩）、IPアッセイの収量が高くなることが知られています。多くの場合、この高い収率は向上したバックグラウンドに伴うと考えられています。当社の研究者は、Pierceクラシック磁気IP/Co-IPキットを用いた一晩の抗体サンプル結合に続いて免疫沈降を行うと、収量は増加しますがバックグラウンドは増加しないことを発見しました。そのため、可能な限り、この結合ステップを1時間以上実施することを推奨します。

プロトコルの概要：
•IP抗体で細胞ライセートを室温で1～2時間または4℃で一晩インキュベートします
•抗原抗体複合体をタンパク質A/G磁気ビーズに室温で1時間結合します。
•IP溶解／洗浄バッファーでビーズを2回洗浄し、精製水で1回洗浄します。
•抗原／抗体複合体を溶出します。

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