Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells

Citations & References (3)

Thermo Scientific™

Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells

製品番号（カタログ番号）	数量
89839	230 mL

製品番号（カタログ番号） 89839

価格（JPY）

108,300

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230 mL

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Thermo Scientific™リソソーム濃縮キット（組織および培養細胞用）では、細胞および組織の粗抽出物からのインタクトなリソソームの分離と濃縮ができます。このキットは、25の抽出物を調製するのに十分な試薬を提供し、汚染細胞構造からリソソームを密度ベースで分離するためにOptiPrep細胞分離培地を使用します。分離されたリソソームは、プロテオミクス研究用の2D/MS、電子顕微鏡、疾患プロファイリングおよび遺伝子発現、シグナル伝達、相互作用または局在など、多くの下流アプリケーションに使用できます。

リソソーム濃縮キット（組織および培養細胞用）の特長：

•効率的かつ使用が簡単 — キットの試薬と勾配遠心法で汚染構造からオルガネラを単離
• 適合性 — 2D/MS、電子顕微鏡解析、疾患プロファイリング、遺伝子発現解析、シグナル伝達、および相互作用や局在性研究などの下流アプリケーション用に試料を調製
• 完全 —キットには25回分の試薬が含まれています

このキットにより、細胞や組織から無傷の細胞小器官を濃縮できます。各キットは、汚染細胞構造からオルガネラを単離させるために密度勾配遠心法を採用しています。分離したオルガネラは、2D/MS、電子顕微鏡解析、疾患プロファイリング、遺伝子発現解析、シグナル伝達、および相互作用や局在性研究を含む多数の下流アプリケーションに利用できます。

組織からのオルガネラの濃縮：
生後6～8週間のメスのSprague-Dawleyラット、平均体重160 gで、一晩絶食させてからと殺しました。肝臓と腎臓を切除し、氷冷PBSで洗浄し、外科用ハサミを使用して細かく切り刻み、Polytron™組織ティアラｰを使用して、8000rpmで45秒間、氷冷試薬Aでホモジナイズしました。続いて試薬Bを添加し、ホモジネートを遠心分離して細胞破片を除去しました。その結果得られた上清を、OptiPrep™細胞分離培地の不連続勾配に重ね、遠心分離して標的細胞小器官を分離および濃縮しました。ターゲットバンドをグラジエントから除去し、ウェスタンブロッティングで分析しました。

細胞からのオルガネラの濃縮：
いくつかの細胞株からリソソーム単離について調べました。A431 [American Type Culture Collection（ATCC™ Resource Center）、 #CRL-1555]、HeLa（ATCC、#CCL-2）、およびHepG2細胞（ATCC、#HB-8065）。細胞は80～90%のコンフルエンシーまで増殖しました。約50～200 mgのウェット細胞ペーストを回収し、リソソーム濃縮用に処理しました。細胞に氷冷リソソーム試薬Aを添加し、15Wの電力を供給する15パルスのMisonix Sonicator 3000を使用して溶解しました。

続いて、リソソーム試薬Bを添加し、ホモジネートを遠心分離して細胞破片を除去しました。その結果得られた上清を、OptiPrep細胞分離培地のいくつかの不連続グラジエント上に重ね、遠心分離して標的オルガネラを分離および濃縮しました。ターゲットバンドをグラジエントから除去し、総ライセートとともにタンパク質量で標準化し（特に指定がない限り）、ウェスタンブロッティングで分析しました。

関連製品
培養細胞用ミトコンドリア分離キット
組織用ミトコンドリア分離キット

研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。

数量230 mL

試薬タイプオルガネラ単離、細胞内分画

対応可能対象細胞または組織をそれぞれ50〜200 mgを含む25サンプル

形状キット、液体

製品タイプLysosome Enrichment Kit

Unit SizeEach

組成および保存条件

受け取り後4℃で保存。製品は室温で出荷

よくあるご質問（FAQ）

Which specific ultracentrifuge tubes do you recommend using when working with the Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells (Cat. No. 89839)?

We recommend using 8 mL open top ultracentrifuge tubes that are compatible with the specific rotor being used in the lab. Specifically, our R&D team has used Thermo Scientific 03020 tubes (https://www.fishersci.com/shop/products/03020/03020) with Thermo Scientific Sorvall MTX 150 Micro-Ultracentrifuge (Cat. No. 46960) and S58-A Fixed Angle Rotor (Cat. No. 45866). For any other ultracentrifuge, the tubes will need to match the rotor. If the rotor does not take 8 mL tubes, the protocol can be scaled to match the tube size.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Dialysis, Desalting, and Concentration Support Center.

Can we use frozen cells and tissues with the Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells (Cat. No. 89839)?

We have not tested the isolation of lysosomes from frozen tissues using this kit. We recommend using fresh tissues only as freeze-thaw compromises membrane integrity and it may affect the protein yield.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Can you provide the shelf-life for the Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells?

The Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells is covered under our general 1-year warranty and is guaranteed to be fully functional for 12 months from the date of shipment, if stored as recommended. Please see section 8.1 of our Terms & Conditions of Sale (https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Terms-and-Conditions-of-Sale.pdf) for more details.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

Can I use the Lysosome Enrichment Kit for Tissue and Cultured Cells (Cat. No. 89839) for isolation of the cytosolic fraction?

Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells has been designed for isolation and enrichment of intact lysomes from crude cell and tissue extracts. We do not have any guidelines for isolation of the cytosolic fraction as the rest of the density gradient was not defined in-house.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Purification and Isolation Support Center.

What kits do you offer for cell fractionation?

We offer the following kits for cell fractionation:

Mem-PER Plus Membrane Protein Extraction Kit, Cat. No. 89842
NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents, Cat. No. 78835
Subcellular Protein Fractionation Kit for Cultured Cells, Cat. No. 78840
Subcellular Protein Fractionation Kit for Tissues, Cat. No. 87790
Mitochondrial Isolation Kit for Cultured Cells, Cat. No. 89874
Mitochondrial Isolation kit for Tissue, Cat. No. 89801
Lysosome Enrichment Kit for Tissues and Cultured Cells, Cat. No. 89839

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Lysis and Fractionation Support Center.

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引用および参考文献 (3)

引用および参考文献

Abstract

P-glycoprotein mediates drug resistance via a novel mechanism involving lysosomal sequestration.

Authors:Yamagishi T, Sahni S, Sharp DM, Arvind A, Jansson PJ, Richardson DR

Journal:

PubMed ID:24062304

'Localization of the drug transporter P-glycoprotein (Pgp) to the plasma membrane is thought to be the only contributor of Pgp-mediated multidrug resistance (MDR). However, very little work has focused on the contribution of Pgp expressed in intracellular organelles to drug resistance. This investigation describes an additional mechanism for understanding how ... More

Dysfunction of autophagy participates in vacuole formation and cell death in cells replicating hepatitis C virus.

Authors:Taguwa S, Kambara H, Fujita N, Noda T, Yoshimori T, Koike K, Moriishi K, Matsuura Y

Journal:J Virol

PubMed ID:21994453

Hepatitis C virus (HCV) is a major cause of chronic liver diseases. A high risk of chronicity is the major concern of HCV infection, since chronic HCV infection often leads to liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Infection with the HCV genotype 1 in particular is considered a clinical risk factor ... More

ErbB2 trafficking and degradation associated with K48 and K63 polyubiquitination.

Authors:Marx C, Held JM, Gibson BW, Benz CC

Journal:Cancer Res

PubMed ID:20406983

The overexpressed ErbB2/HER2 receptor is a clinically validated cancer target whose surface localization and internalization mechanisms remain poorly understood. Downregulation of the overexpressed 185-kDa ErbB2 receptor is rapidly (2-6 hours) induced by the HSP90 chaperone inhibitor geldanamycin (GA), whereas its downregulation and lysosomal degradation are more slowly (24 hours) induced ... More