pHrodo™ Red 色素は細胞外では非蛍光であるため、洗浄ステップとクエンチャー色素は不要で、高速かつ高い再現性の染色プロトコルが可能です。洗浄ステップとクエンチャー色素を排除することで、特にプレートリーダーベースのアッセイにおいてアッセイの再現性が向上します。.
柔軟なアプリケーション
グラム陽性菌やグラム陰性菌のファゴサイトーシスの簡易分析には、すぐに使用できるpHrodo™ Red BioParticles™コンジュゲートを使用して、微生物やタンパク質の標識にはアミン反応性のpHrodo™ Red SEフォームを使用してください。
複数のプラットフォームに対応 pHrodo™ Red色素コンジュゲートは、プレートリーダー、蛍光顕微鏡イメージング、およびフローサイトメトリーなどのアプリケーションで使用できます。pHrodo™ Red食作用粒子ラベリングキットおよび™ Red E. coli BioParticles™食作用キット(サイトメトリー用)は、フローサイトメトリーによる全血サンプル中の食細胞活性の迅速かつ簡便な測定を目的として設計されています。このキットには、粒子の摂取と赤血球溶解の評価に必要なすべての試薬が含まれています。Labeling Kitには、pHrodo™ Red色素で微生物を標識するために必要な試薬も含まれています。両方のキットには、約100回のアッセイに必要な試薬が含まれています。
pHrodo™ Red BioParticles™コンジュゲートの最適吸収波長と最大蛍光発光は、それぞれ約560 nmおよび約585 nmです。ただし、ほとんどのフローサイトメーターに搭載されている488 nmアルゴンイオンレーザーにより、フルオロフォアは容易に励起されます。
I am performing a phagocytosis assay of macrophages engulfing pHrodo-labeled bacteria. What do you recommend for fixation after the phagocytosis?
pHrodo is relatively non-fluorescent until it enters the acidic phagosome, at which point its fluorescence increases. If you fix the sample, the pHrodo will only reflect the pH of the buffer the cells are in, and not the pH of the phagosome. For this reason, we do not recommend fixing samples. If you want to see how many cells engulfed the labeled bacteria, fix the cells and then place the fixed cells in an acidic buffer for the assay.
SLAM is a microbial sensor that regulates bacterial phagosome functions in macrophages.
Authors:Berger SB, Romero X, Ma C, Wang G, Faubion WA, Liao G, Compeer E, Keszei M, Rameh L, Wang N, Boes M, Regueiro JR, Reinecker HC, Terhorst C,
Journal:Nat Immunol
PubMed ID:20818396
'Phagocytosis is a pivotal process by which macrophages eliminate microorganisms after recognition by pathogen sensors. Here we unexpectedly found that the self ligand and cell surface receptor SLAM functioned not only as a costimulatory molecule but also as a microbial sensor that controlled the killing of gram-negative bacteria by macrophages. ... More
Ehrlichia chaffeensis infections in Drosophila melanogaster.
Authors:Luce-Fedrow A, Von Ohlen T, Chapes SK,
Journal:Infect Immun
PubMed ID:19687202
Ehrlichia chaffeensis is an obligate, intracellular bacterium, transmitted by the tick Amblyomma americanum, and is the causative agent of human monocytic ehrlichiosis infections. We previously demonstrated that E. chaffeensis is capable of growing in Drosophila S2 cells. Therefore, we tested the hypothesis that E. chaffeensis can infect adult Drosophila melanogaster. ... More
Chemotactic network responses to live bacteria show independence of phagocytosis from chemoreceptor sensing.
Authors:Meena NP, Kimmel AR
Journal:Elife
PubMed ID:28541182
Aspects of innate immunity derive from characteristics inherent to phagocytes, including chemotaxis toward and engulfment of unicellular organisms or cell debris. Ligand chemotaxis has been biochemically investigated using mammalian and model systems, but precision of chemotaxis towards ligands being actively secreted by live bacteria is not well studied, nor has ... More