Alexa Fluor™ 532 C₅ Maleimide

Alexa Fluor™ 532は、周波数を倍加させたNd:YAGレーザーラインに最適な励起を備えた明るい黄色蛍光色素です。Alexa Fluor™ 532色素は、イメージングやフローサイトメトリーで安定したシグナルを生成するために使用され、水溶性でpH 4～10の影響を受けません。反応性色素の組成に加えて、細胞の標識および検出用に最適化されたさまざまな抗体、ペプチド、タンパク質、トレーサー、および増幅基質に結合するAlexa Fluor™ 532色素を提供しています（詳細はこちら）。

Alexa Fluor™ 532のマレイミド誘導体は、タンパク質、オリゴヌクレオチドチオリン酸、または低分子量リガンドのチオール基に色素を結合させる最も一般的なツールです。Alexa Fluor™ 532コンジュゲートは、スペクトルが類似している他のフルオロフォアのコンジュゲートよりも明るい蛍光と優れた光安定性を示します。

このAlexaFluor™ マレイミドの詳細情報

：フルオロフォア標識：Alexa Fluor™ 532色素
反応基 ：マレイミド
反応性： タンパク質およびリガンドのチオール基、オリゴヌクレオチドチオリン酸
コンジュゲートのEx/Em：528／552 nm
減衰係数：78,000 cm-1M-1
分子量：812.88

一般的な結合反応
タンパク質は、pH 7.0～7.5で適切なバッファー（10～100 mmリン酸、トリス、HEPES）に50～100 µM濃度で溶解する必要があります。このpH範囲では、タンパク質チオール基は十分な求核性を有しており、より多くのタンパク質アミン基が存在する場合に試薬とほぼ排他的に反応します。このようなタンパク質は、プロトン化され、比較的不活性です。この時点で、DTTやTCEPなどの10倍モル過剰の還元剤を使用して、ジスルフィド結合を還元することを推奨します。過剰なDTTは透析により除去する必要があり、その後のチオール修飾は、ジスルフィド結合の再形成を防ぐために無酸素状態で行う必要があります。このような対策は、マレイミド結合の前にTCEPを使用する場合には必要ありません。

Alexa Fluor™ マレイミドは通常、使用直前に1-10 mMの濃度で高品質の無水ジメチルスルホキシド（DMSO）に溶解し、ストック溶液はできるだけ遮光する必要があります。一般的に、このストック溶液をタンパク質溶液に撹拌しながら滴加し、タンパク質1モルあたり約10-20モルの試薬を生成します。反応は、遮光しながら室温で2時間、または4℃で一晩、進めることができます。未反応のチオール反応性試薬は、過剰なグルタチオン、メルカプトエタノール、または他の可溶性低分子量チオールを添加することで消費できます。

コンジュゲート精製
標識抗体は、通常Sephadex™ G-25、Biogel™ P-30、または同等のゲルろ過カラムを使用して、遊離Alexa Fluor™ 色素から分離されます。タンパク質のサイズが大きい場合や小さい場合は、適切な分子量分画のゲルろ過培地を選択するか、または透析により精製してください。当社は、さまざまな量の抗体コンジュゲート用に最適化された精製キットを複数提供しています：
0.5～1 mg用Antibody Conjugate Purification Kit（A33086）
20～50 µg用Antibody Conjugate Purification Kit（A33087）
50～100 µg用Antibody Conjugate Purification Kit（A33088）

タンパク質および抗体の標識に関する詳細
当社は、 お客様の出発物質および実験のセットアップに適したMolecular Probes™抗体およびタンパク質標識キットを幅広く提供しています。その他の選択肢は、当社の抗体標識キットをご覧になるか、当社の標識化学選択ツールをご利用ください。標識キットの詳細については、Molecular Probes™ハンドブックのタンパク質および核酸の標識キット—セクション 1.2をご覧ください。

当社では、お客様に合わせてカスタムコンジュゲートを実施
当社のオンラインカタログで目的の製品が見つからない場合は、カスタム抗体またはタンパク質コンジュゲートをご用意ください。当社のカスタム結合サービスは効率的かつ機密性が確保され、品質が保証されています。当社はISO 9001：2000認証を取得しています。