One Shot™ ccdB Survival™ 2 T1R Competent Cells
One Shot&trade; <i>ccd</i>B Survival&trade; 2 T1<sup>R</sup> Competent Cells
Invitrogen™

One Shot™ ccdB Survival™ 2 T1R Competent Cells

One Shot™ ccdB Survival™ 2 T1Rケミカルコンピテントセルは、ccdB遺伝子を含むプラスミドの増殖に適しており、Gateway™ベクター変換システムおよびGateway™デスティネーション、ドナー、およびスーパーコイルエントリーベクターの増殖に使用するように設計されています詳細を見る
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製品番号（カタログ番号）数量
A1046011x50 μL
製品番号（カタログ番号） A10460
価格（JPY）
39,800
Each
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数量:
11x50 μL
One Shot™ ccdB Survival™ 2 T1Rケミカルコンピテントセルは、ccdB遺伝子を含むプラスミドの増殖に適しており、Gateway™ベクター変換システムおよびGateway™デスティネーション、ドナー、およびスーパーコイルエントリーベクターの増殖に使用するように設計されています。形質転換効率>は、1×109形質転換体／µgプラスミドDNAです。ccdB Survival™ 2 T1R大腸菌株は、TOP10株から得られます。ccdB Survival™ 2 T1R大腸菌株には、以下の特長があります。

•ccdB遺伝子産物に対する耐性
•T1およびT5ファージに対する耐性（tonA／fhuA表現型）
•スーパーコイルプラスミドDNAの高収量調製をサポートします（endA1表現型）
•クローン化されたDNAの低減された非特異的組み換え（recA1表現型）

遺伝子型：F-mcrA Δ（MRR-HSDRMS-mcrBC）Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ（ara-leu）7697 galU galK rpsL（StrR）endA1 nupG fhuA::IS2
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
抗生物質耐性菌Yes (Streptomycin)
青／白スクリーニング可
メチル化DNAのクローニング可
不安定DNAのクローニング不安定なDNAのクローニングには不適
F'エピソームを含むF’エピソームが欠落しています
高スループット適合性ハイスループット非対応（手動）
プラスミドの品質を向上可
プラスミドccdB vector propagation
非メチル化DNAの調製非メチル化DNAの調製には適していません
製品ラインOne Shot
製品タイプコンピテントセル
数量11x50 μL
組換えを抑制可
出荷条件ドライアイス
T1ファージ－耐性（tonA）可
形質転換効率レベル高効率（> 10^9 cfu⁄µg）
フォーマットOne Shot
種E. coli
Unit SizeEach
組成および保存条件
内容：
•ccdB Survival™2 T1Rコンピテントセル：11バイアル、各50 µl
• pUC19 DNA（10 pg/µl）：1バイアル、50 µL
• S.O.C.培地：1本、6 ml

Competent Cellは-80℃で保存してください。pUC19 DNAは-20℃で保存してください。SOC培地は4℃または室温で保存してください。

よくあるご質問（FAQ）

I just found out that Library Efficiency DB3.1 and One Shot ccdB Survival T1R cells have been discontinued. Do you offer an alternative for propagating ccdB-containing plasmids?

We offer One Shot ccdB Survival 2 T1R cells (Cat. No. A10460) for propagating ccdB-containing plasmids.

What kind of competent cells should I use to propagate Donor vectors and Destination vectors? What cells should I use after the BP or LR recombination reaction?

All Donor vectors and Destination vectors contain the ccdB cell death gene to reduce background of non-recombined BP/LR plasmids. Therefore, growing non-recombined vector requires special cells (One Shot ccdB Survival 2 T1R Competent Cells) which are resistant to the lethal effects of ccdB. On the other hand, general E. coli cloning strains including TOP10 or DH5a may be used for plating the BP or LR reaction, or for propagation and maintenance of recombined Gateway constructs.

I need a competent cell strain that is ccdB resistant. The Library Efficiency DB3.1 cells you offer have been discontinued, as well as the One Shot ccdB Survival T1R chemically competent cells. What do you recommend?

Please use our ccdB Survival 2 T1R competent cell strain.

How do you recommend that I prepare my DNA for successful electroporation of E. coli?

For best results, DNA used in electroporation must have a very low ionic strength and a high resistance. A high-salt DNA sample may be purified by either ethanol precipitation or dialysis.

The following suggested protocols are for ligation reactions of 20ul. The volumes may be adjusted to suit the amount being prepared.

Purifying DNA by Precipitation: Add 5 to 10 ug of tRNA to a 20ul ligation reaction. Adjust the solution to 2.5 M in ammonium acetate using a 7.5 M ammonium acetate stock solution. Mix well. Add two volumes of 100 % ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at 4C. Remove the supernatant with a micropipet. Wash the pellet with 60ul of 70% ethanol. Centrifuge at 12,000 x g for 15 min at room temperature. Remove the supernatant with a micropipet. Air dry the pellet. Resuspend the DNA in 0.5X TE buffer [5 mM Tris-HCl, 0.5 mM EDTA (pH 7.5)] to a concentration of 10 ng/ul of DNA. Use 1 ul per transformation of 20 ul of cell suspension.

Purifying DNA by Microdialysis: Float a Millipore filter, type VS 0.025 um, on a pool of 0.5X TE buffer (or 10% glycerol) in a small plastic container. Place 20ul of the DNA solution as a drop on top of the filter. Incubate at room temperature for several hours. Withdraw the DNA drop from the filter and place it in a polypropylene microcentrifuge tube. Use 1ul of this DNA for each electrotransformation reaction.

When should DMSO, formamide, glycerol and other cosolvents be used in PCR?

Cosolvents may be used when there is a failure of amplification, either because the template contains stable hairpin-loops or the region of amplification is GC-rich. Keep in mind that all of these cosolvents have the effect of lowering enzyme activity, which will decrease amplification yield. For more information see P Landre et al (1995). The use of co-solvents to enhance amplification by the polymerase chain reaction. In: PCR Strategies, edited by MA Innis, DH Gelfand, JJ Sninsky. Academic Press, San Diego, CA, pp. 3-16.

Additionally, when amplifying very long PCR fragments (greater than 5 kb) the use of cosolvents is often recommended to help compensate for the increased melting temperature of these fragments.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our PCR and cDNA Synthesis Support Center.