Bac-to-Bac™ N-His TOPO™ Expression System

Bac-to-Bacバキュロウイルス発現は、昆虫細胞における高レベルのタンパク質発現のためのバキュロウイルス生成の効率的な方法です。これは、昆虫細胞の相同組換えではなく、E. coliにおける部位特異的転移による組換えウイルスの生成に依存しています。pFastBac N-His TOPO発現システムの特長：

•柔軟性—Bac-to-Bac N-His TOPOベクターには、TEV開裂サイトを持つN末端Hisタグが含まれており、ニッケルキレート樹脂を使用したHisタグ融合タンパク質の生成（Invitrogen ProBond精製システムなど）や、Invitrogen AcTEVプロテアーゼの助けを借りた天然タンパク質の生成を簡単に行えます。

• 迅速なクローニングと簡単なスクリーニング—Blunt TOPOクローニング技術により、平滑末端PCR製品のpFastBac TOPOベクターへのクローニングを5分以内で行えます。さらに、pFastBac TOPO発現キットには、他の標準的なクローニング株と比べて時間が2倍短縮されているため、アンピシリン選択プレートでプレーティングしてから8時間後のコロニーの可視化を可能にするMach1-T1R E. coliが付属しています。 TOPOクローニングのメリットの詳細を見る›

• ExpiFectamine Sfトランスフェクション試薬を使用した高いトランスフェクション効率—Bac-to-Bac TOPO発現キットに、次世代のExpiFectamine Sfトランスフェクション試薬が付属するようになり、迅速で柔軟性のあるプロトコルを使用して昆虫細胞内でのDNAトランスフェクションを効率的に行えるようになりました。この試薬の詳細を見る›

• 時間を短縮できる発現バクミドmid—Bac-to-Bacシステムにより、pFastBacベクターの発現カセットはDH10Bac E. coliコンピテントセル内の親バクミドと再結合し、発現バクミドを形成します。その後、バクミドは昆虫細胞内にトランスフェクションされ、組換え型バキュロウイルス粒子が産生されます。

•コロニースクリーニングが容易— DH10Bac E. coliの親バクミドには、lacZa遺伝子のセグメントが含まれています。lacZa遺伝子は、発現カセットがバクミドに転移すると破壊され、組換えコロニーの同定を容易にする組換え体の青／白選択が可能になります。

• 高レベルなタンパク質発現—pFastBacベクターは強力なポリヘドリンプロモーターを使用して、Sf9、Sf21、High Five細胞など、さまざまな昆虫細胞株で高レベルな発現を生じます。