Amplex™ Redアセチルコリン/アセチルコリンエステラーゼアッセイキットは、蛍光マイクロプレートリーダーまたはフルオロメーターでアセチルコリンエステラーゼ(AChE)活性を検出する超高感度の手法を提供します。
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•1時間で0.002 U/mLという低活性レベルのAChEを検出できます
• 過剰なAChEを使用して、0.3 µMという低濃度のアセチルコリンを検出できます
• 0.3 µM~100 µMのアセチルコリン検出範囲を実現します
• 複数のタイムポイントでの測定が可能なフォーマットです
• 自己蛍光干渉を最小限に抑えるように設計されています
過酸化水素用の高感度蛍光プローブである10アセチル-3,7ジヒドロキシフェノキサジン(Amplex™ Red試薬)を使用して、間接的にAChE活性をモニタリングします。AChEはアセチルコリン基質をコリンに変換します。これがコリンオキシダーゼによって酸化され、ベタインおよび過酸化水素になります。西洋ワサビペルオキシダーゼが存在する場合、過酸化水素は1:1の化学量論比でAmplex™ Red試薬と反応し、高蛍光性産物であるレゾルフィンを生成します。
レゾルフィンの最大吸収波長と最大蛍光波長はそれぞれ571 nmと585 nmであるため、大部分の生物学的サンプルでは、自己蛍光による干渉はほとんど発生しません。デンキウナギから精製されたAChEを用いた実験では、Amplex™ Redアセチルコリン/アセチルコリンエステラーゼアッセイキットは、1時間の反応時間で、0.002 U/mLという低レベルのAChEを検出できています。また、アッセイの過剰なAChEを利用することで、0.3 µMという低レベルのアセチルコリンを検出することもできます。アセチルコリンの検出範囲は、0.3 µM~100 µMです。
Amplex™ Redアッセイは、幅広い研究にご利用いただけます検証済みのAmplex™ Redアッセイは幅広く用意されており、細胞シグナル伝達および脂質、神経生物学、炎症および免疫機能、代謝の研究にご利用いただけます。また、より高い感度と明るい蛍光性を提供する第二世代試薬であるAmplex™ UltraRed試薬(カタログ番号A36006)や、Amplex™ Red/UltraRed停止試薬も提供しています(カタログ番号A33855)。Amplex™ Red/UltraRed停止試薬を使用することで、ユーザーが決定した時点で蛍光シグナル生成反応を終了させることができるため、利便性と制御性が提供されます。停止試薬を添加してから少なくとも3時間は、蛍光シグナルは安定を保ちます。カスタムアッセイの設計およびパッケージもご利用いただけます。