GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System
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Invitrogen™

GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System

GeneArt™部位特異的変異導入システムは、3時間以内にin vitroで標的コンストラクト上に変異を形成できる最先端のシンプルで便利な、高効率の方法です。このシステムは、広く使用されているGeneTailor™部位特異的変異導入システムに代わるもので、現在市販されている部位特異的変異導入製品の最先端に位置するように完全に再設計されています。この製品は、当社の突然変異導入技術を次のレベルに引き上げます。注:PCR酵素はシステムに含まれないため詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
A1328216 Reactions
製品番号(カタログ番号) A13282
価格(JPY)
103,700
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数量:
16 Reactions
GeneArt™部位特異的変異導入システムは、3時間以内にin vitroで標的コンストラクト上に変異を形成できる最先端のシンプルで便利な、高効率の方法です。このシステムは、広く使用されているGeneTailor™部位特異的変異導入システムに代わるもので、現在市販されている部位特異的変異導入製品の最先端に位置するように完全に再設計されています。この製品は、当社の突然変異導入技術を次のレベルに引き上げます。注:PCR酵素はシステムに含まれないため、別途購入する必要があります。このキットに推奨される酵素は、AccuPrime™ Pfx DNAポリメラーゼです。

高性能 – 最大14 kbのプラスミドに最大12ヌクレオチドを置換、欠失、挿入できます
効率的 – 目的の変異体を初めて得られます。3 kbプラスミドでは、正しい変異が90%以上です
高速 – シンプルで最小限の操作のプロトコルにより、3時間以内に変異プラスミドDNAが得られます
汎用性 – さまざまなサイズのプラスミドや、あらゆるサンプル源から単離したDNAを使用でき、専用のベクター、宿主株、制限酵素部位は不要です

目的の変異を簡単に作製
GeneArt™部位特異的変異導入システムで作製した変異は、DNAメチル化酵素、高忠実性DNAポリメラーゼ、組み換え酵素、および大腸菌のネイティブMcrBCエンドヌクレアーゼの固有特性に依存します。プライマーに、希望する変異(最大12ヌクレオチド)を組み込むだけで、PCR、組み換え、形質転換の後に、最大90%の効率で目的の変異のみを含むベクターが得られます。変異を加えるテンプレートベクターとして、あらゆるサンプル源から最大14 Kbサイズのものまで単離できます。完全なコンストラクトを作製する場合や、関連のないDNAの大型断片を結合する場合には、GeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキット(カタログ番号A13288)またはGeneArt™高次遺伝子アセンブリシステム(カタログ番号A13286)をご覧ください。

最適な変異導入プロトコル
GeneArt™部位特異的変異導入システムは、効率性と簡便性を最適化しています。DNAのメチル化ステップと増幅ステップを1つの反応にまとめたため、in vitro DpnI消化ステップは不要です。メチル化と増幅後、増幅したPCR産物の10分間のin vitro組み換え反応によりコロニー形成量が3~10倍に増加するため、より高い突然変異導入効率が得られます。変異したDNAをDH5α™大腸菌細胞に最終的に形質転換すると、メチル化された親DNAが消化され、無傷の非メチル化変異誘発生成反応産物のみが残されます。精製ステップや追加の消化は必要ありません。個々のコロニーを翌日に選択して変異を確認できます。
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
菌株または酵母株DH5α
細胞タイプケミカリーコンピテント大腸菌
効率90%
使用対象(アプリケーション)シームレスクローニング&遺伝子アセンブリ
変異導入能単一部位突然変異導入
変異導入領域長(最大)12ヌクレオチド
変異タイプ欠失、挿入、置換
プラスミド最長14 kbのプラスミド
製品ラインGeneArt
製品タイプ部位特異的変異導入システム
数量16 Reactions
Unit SizeEach
組成および保存条件
各GeneArt™部位特異的変異導入システムには、16回の反応に十分な試薬とコントロールが含まれています。DNAメチル化酵素、S-アデノシルメチオニン、酵素ミックスおよびバッファー、エンハンサー、0.5 M EDTA、滅菌水、pUC19WHITE突然変異導入コントロール、およびOne Shot™ MAX Efficiency DH5α™-T1Rケミカルコンピテントセル。

PCR酵素はシステムに含まれないため、別途購入する必要があります。このキットに推奨される酵素は、AccuPrime™ Pfx DNAポリメラーゼです。

-80℃モジュールと大腸菌コンピテントセルは-80℃で保存します。

他のすべての構成品°

は-20℃で保管してください。適切に保管した場合、6カ月間安定性を保証します。

よくあるご質問(FAQ)

Is the DNA methylase from GeneArt Site-Directed Mutagenesis kits available separately?

We do not offer the DNA methylase from GeneArt Site-Directed Mutagenesis kits as a separate product.

How does PCR with two overlapping primers result in a final product with homology at both ends?

During the first cycle of PCR on the circular template, the polymerase will generate two linear products that are able to anneal and undergo primer extension in the next cycle. PCR products that incorporate the mutation at both ends will accumulate in subsequent cycles. After PCR, the recombination reaction results in circularization of the PCR product which enhances the mutagenesis efficiency.

How do I design my primers for my mutation using the GeneArt Site-Directed Mutagenesis System? How large of a mutation site can I have and where should the mutation be located in the primer? How long should the primer be?

The primer should be 30-45 nucleotides in length, with the mutation centrally located. The mutation should be flanked by at least 15-20 nucleotides on either side, depending on the size of the mutation, with the primer length no longer than 45 nucleotides. We recommend using our online GeneArt primer design tool.

What is the concentration of 200X SAM in the GeneArt Site-Directed Mutagenesis System?

The concentration is 32 mM.

What is the difference between the GeneArt Site-Directed Mutagenesis Kit and the older discontinued GeneTailor kit?

The differences are as follows:

- The GeneArt kit combines the methylation and DNA amplification steps, saving 1 hour in the protocol.
- The enzyme mix from the GeneArt Seamless Cloning and Assembly Kit is part of the protocol, boosting the colony output without the need to do many PCR cycles (another time saving step).
- The new kit also contains an enhancer used during the PCR step that increases mutagenesis efficiency for a wide range of plasmid sizes.