GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Kit

GeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキットを使用すると、30分間の室温反応1回で、任意の配列で構成される1～4個のPCR断片をあらゆる線形化ベクターへ同時に方向をそろえてクローニングできます。このキットには、DNAフラグメントの構築と、組み換えベクターの選択と増殖のための大腸菌への形質転換に必要なすべてのものが含まれています。

•高速で簡単 — 1つのベクター（最大13 Kb）に、選択した配列を伴うDNA断片を最大4個クローニングできます。制限酵素消化、ライゲーション、組み換え部位は必要ありません
• 正確で効率的 — 希望するものを、希望する位置に、希望する方向でクローニングできるように設計されているため、最大90％の正確なクローンを得られ、余分な配列が残りません
• ベクターの柔軟性 — 当社の線形ベクターまたはお客様が選択したベクターを使用できます
• 無料ツール — プロジェクトをステップバイステップで進められる無料のウェブベースのインターフェースを用いてDNAオリゴなどをデザインできます
• 多様なアプリケーション — DNA断片の迅速な組み合わせ、追加、削除、または交換により、多くの合成生物学と分子生物学の技術を効率化します

4個以上のDNAフラグメントで、最終的に分子が110 Kbを超える場合、またはPCRで増幅するには長すぎる既存のDNA要素を使用する場合は、GeneArt™高次遺伝子アセンブリシステム（カタログ番号A13285）をご検討ください。

シンプルで迅速なクローン作製
GeneArt™シームレスクローニングは、チューブでのアセンブリ反応と、続くOne Shot™ケミカルコンピテントTOP10大腸菌への形質転換で構成されるシンプルな2段階プロセスです。キットでは、特許取得済みの酵素ミックスの特性を使用して、余分な配列や傷跡を残さずに、末端相同性が共通のDNA断片を構築します（シームレス）。その後、アセンブリ反応物の一部を、付属のコンピテントTOP10セルに形質転換し、翌日に解析できるクローンが得られます。必要な15塩基対の末端相同性は、カスタムDNAオリゴを用いるPCR増幅によって容易に設計できます。

クローニングの効率、柔軟性、正確性
GeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキットを用いる場合、クローニング効率に影響を与える主な要因は、DNA要素のサイズ（100 bp～5 Kb）、最終分子の総サイズ（≤ 13 Kb）、およびフラグメントの品質と特異性です。PCR断片の末端（Aオーバーハングまたは平滑）はクローニング効率に影響しません。

pUC19Lにクローニングしたさまざまなフラグメントの一般的なクローニング効率は以下のとおりです。
•90％ - 5 Kb DNA要素1個
• 70％ - フラグメント4個、それぞれ1 Kb
• 40％ - DNAフラグメント4個、それぞれ2 Kb

クローニングの成功がインサート配列とベクタータイプに左右されないため、制限酵素消化またはPCRによって線形化できる限り、ほぼすべての配列や配列の組み合わせをデザインしてあらゆるプラスミドに加えることができます。反応で得られる環状化クローンには、最初のベクター、インサート、指定の相同性配列のみが含まれ、不要なヌクレオチドの挿入はありません。

in silicoでのクローニング設計をサポート
GeneArt™シームレスクローニングの重要なステップは、フラグメントとオリゴを、適切な相同性と間隔を備えて正しく設計して、クローンを確実に構築することです。設計プロセスを簡略化し高速化するために、当社は無料のオンラインツールを提供し、in silicoでの実験計画を支援しています。このツールでは、実験設計と製品仕様との適合性をチェックし、クローニングするさまざまな要素のPCR増幅物に対する末端相同性を持つDNAオリゴを設計します。また、ベクターをグラフィカルに表示し、Vector NTI™ソフトウェアと互換性のあるGenBank形式のダウンロード可能なアノテーション付きシーケンスも提示できます。

アプリケーション
GeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキットは、さまざまな分子生物学や合成生物学アプリケーションなどにおいてクローニングやDNAアセンブリ実験を促進するように設計されています。この製品では、交換可能な部分を備えたモジュラー式発現ベクターの作製が可能で、複数のステップを必要とするさまざまなタスクの実行にも使用できます。このキットを使用すると、融合タンパク質の構築、既存ベクターの制限部位などのDNA要素の削除、置換、または追加、および遺伝子配列の操作を必要とする他の多くの手法を簡単に行うことができます。