GeneArt™ Seamless PLUS Cloning and Assembly Kit

第一世代のシームレスクローニングおよびアセンブリキットと同様に、GeneArt™シームレスPLUSクローニングおよびアセンブリキットは、30分以内の室温反応1回で、任意の配列で構成される1～4個のPCRフラグメントをあらゆる線形化ベクターへ同時に方向をそろえてクローニングするために必要なすべてを備えたキットです。ただし、シームレスPLUSには、従来のキットに勝る利点がいくつかあります。

•効率の向上：クローニング効率を高めるための大型フラグメント用のプレクローニングオプション
• より大きなコンストラクト：最大40 kbのコンストラクトを作製
• 汎用性：大部分のグラム陰性細菌で複製できる収容能が高い広域結合ベクター

上記の改善点は、すべてのGeneArt™シームレスクローニングおよびアセンブリキットに共通する主な利点を組み合わせたものです。

•高速で簡単—1つのベクターに、選択した配列を伴うDNA断片を最大4個クローニングできます。制限酵素消化、ライゲーション、組み換え部位は必要ありません
• 正確で効率的—希望するものを、希望する位置に、希望する方向でクローニングできるように設計されているため、最大90％の正確なクローンを得られ、余分な配列が残りません
• 無料ツール—プロジェクトをステップバイステップで進められる無料のウェブベースツールを用いてin silicoで最終コンストラクトやDNAオリゴをデザインできます
• ベクターの柔軟性—当社の線形ベクターまたはお客様が選択したベクターを使用できます
• 多様なアプリケーション—DNA断片の迅速な組み合わせ、追加、削除、または交換により、多くの合成生物学と分子生物学の技術を効率化します

4個以上のDNAフラグメント、または最終的に分子が110 Kbを超える場合は、GeneArt™高次遺伝子アセンブリシステムをご検討ください。

シンプルで迅速なクローン作製
GeneArt™シームレスPLUSクローニングは、in vitroアセンブリと、続くOne Shot™ DH10B™ T1R SA大腸菌コンピテントへの形質転換で構成されるシンプルな2段階プロセスです。このキットは、特許取得済みの酵素／バッファーミックスを使用して、末端相同性を共有するDNAフラグメントを構築でき、最終コンストラクトに余分な配列や傷跡がありません（「シームレス」）。当社の無料ウェブツールを使用して設計したカスタムDNAオリゴを用いたPCR増幅により、端末相同性を簡単に組み込むことができます。

クローニングの効率、柔軟性、正確性
GeneArt™シームレスPLUSクローニングおよびアセンブリキットを用いる場合、クローニング効率に影響を与える主な要因は、DNA断片のサイズ（100 bp～10 Kb）、最終分子の総サイズ（≤ 40 Kb）、および各フラグメントの品質と特異性です。

さまざまなフラグメントの標準的なクローニング効率：

•>95% - フラグメント4個、それぞれ5 Kb
• >90% - フラグメント4個、それぞれ10 Kb

クローニングの成功がインサート配列とベクタータイプに左右されないため、制限酵素消化またはPCRによって線形化できる限り、ほぼすべての配列や配列の組み合わせをデザインしてあらゆるプラスミドに加えることができます。反応で得られる環状化クローンには、最初のベクター、インサート、指定の相同性配列のみが含まれ、不要なヌクレオチドの挿入はありません。

in silicoでの設計をサポート
GeneArt™シームレスPLUSクローニングの重要なステップは、フラグメントとオリゴを、適切な相同性と間隔を備えて正しく設計して、クローンを確実に構築することです。当社は、無料のオンラインツールのGeneArt™シームレスまたは高次アセンブリおよび突然変異導入用の設計ツールを提供して、お客様のin silico実験の設計を支援しています。このツールでは、実験設計と製品仕様との適合性をチェックし、クローニングするさまざまな要素のPCR増幅物に対する末端相同性を持つDNAオリゴを設計します。また、ベクターをグラフィカルに表示し、Vector NTI™ソフトウェアと互換性のあるGenBank形式のダウンロード可能なアノテーション付きシーケンスも提示できます。

アプリケーション
GeneArt™シームレスPLUSクローニングおよびアセンブリキットは、さまざまな分子生物学や合成生物学アプリケーションなどにおいてクローニングやDNAアセンブリ実験を促進するように設計されています。この製品では、交換可能な部分を備えたモジュラー式発現ベクターの作製が可能で、複数のステップを必要とするさまざまなタスクの実行にも使用できます。このキットを使用すると、融合タンパク質の構築、既存ベクターの制限部位などのDNA要素の削除、置換、または追加、および遺伝子配列の操作を必要とする他の多くの手法を実施できます。