Thermo Scientific™

Jump In™ T-REx™ CHO-K1 Kit

製品番号（カタログ番号）	数量
A15007	1キット

製品番号（カタログ番号） A15007

価格（JPY）

1,546,000

The Jump-In™ T-REx™ CHO-K1 Kit allows the targeted integration of genetic material into a specific pre-engineered R4 site in the Jump-In™ CHO-K1 cell line, to create an inducible isogenic stable cell line with less effort and in less time than traditional cell engineering methods. These cells stably express the tetracycline repressor protein, allowing for inducible expression of your retargeted gene of interest upon the addition of doxycycline.

The high retargeting efficiency, made possible by the R4 sites in the CHO-K1 cell line, allows the use of the isogenic pool for additional experiments without the need for clonal selection. Alternatively, the high retargeting efficiency allows for the easy selection of a positive stable clone expressing your gene of interest.

Jump-In™ T-REx™ CHO-K1キットを使用すると、Jump-In™ CHO-K1細胞株の特定の遺伝子改変済みR4部位を標的として遺伝子物質を統合し、従来の細胞工学手法よりも少ない労力かつ短時間で、誘導型のアイソジェニック安定細胞株を作成できます。これらの細胞はテトラサイクリンリプレッサータンパク質を安定的に発現し、ドキシサイクリンを添加することで、リターゲティングした目的遺伝子を誘導的に発現できます。

CHO-K1細胞株のR4部位により可能になった高いリターゲティング効率により、クローン選択を必要とせずに、アイソジェニックニックプールを追加実験に使用できます。また、リターゲティング効率が高いため、目的の遺伝子を発現する陽性で安定したクローンを簡単に選択できます。

Jump-In™ T-REx™ CHO-K1キットでは、以下のことが可能です。

• 従来の細胞工学法に比べ、約半分の時間で、安定的に設計されたアイソジェニック細胞プールを迅速かつ効率的に開発
• ドキシサイクリンを使用して目的遺伝子を誘導的に発現
• 遺伝子ファミリー、アイソフォーム、あるいはオルソログの比較分析に最適なソリューションとして、定義済みゲノム遺伝子座からのアイソジェニック発現を利用
• 作業フローが簡易なため、複数の細胞株を並行して生成
• 複雑なライセンスや制限なしに簡単に技術にアクセス

迅速かつ効率的な遺伝子改変細胞株の生成により時間を短縮
Jump-In™ T-REx™ CHO-K1キットを使用すると、手間のかかるクローン単離や解析を行うことなく、わずか2週間で機能的な細胞プールを生成でき、能率的なワークフローによって複数の細胞株を同時に容易に生成できます。陽性クローンの割合が高いため、クローン細胞株の生成も時間と労力を削減して行うことができます。さらに、Jump-In™技術は、制約的なライセンス要件なしで無制限の細胞株を生成する自由を提供します。

実験能力を高める
Jump-In™ T-REx™ CHO-K1キットは、毒性または不安定な目的遺伝子の誘導発現を可能にし、一過性遺伝子改変技術が問題となる標的やアッセイに最適なソリューションを提供します。このキットは、遺伝子ファミリー、アイソフォーム、あるいはオルソログの標的パネルを作製する際にも便利です。Gateway™デスティネーションベクターは大きなインサートでも可能なため、大きなタンパク質やマルチユニットタンパク質の遺伝子コーディングは問題ありません。

キットの内容：

Jump-in™ T-REx™ CHO-K1細胞（2バイアル、各1 mL）
pJTI™ R4 Dest CMV TO pAベクター（100 µg） -- Tetオペロンを使用することにより、強力なCMVプロモーターの制御下で目的遺伝子の誘導発現を促進するGateway™デスティネーションベクター。
pJTI™ R4 Intベクター（100 µg） -- 目的遺伝子のR4部位へのリターゲティングを容易にするために、R4インテグラーゼを発現します。

別売り：

pJTI™ R4 CMV-TO MCS pAベクター -- Tetオペロンを使用することにより、強力なCMVプロモーターの制御下で目的遺伝子の誘導発現を促進するマルチサイトクローニングベクター。
pJTI™ R4 EXP CMV-TO EmGFP pAベクター -- Tetオペロンを使用することにより、強力なCMVプロモーターの制御下でGFPを誘導発現するコントロールベクター。

研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。

細胞株CHO-K1

供給タイプTransfection

発現システム哺乳動物

使用対象（アプリケーション）アッセイ開発

誘導試薬テトラサイクリン

主機能安定細胞株開発、ターゲット挿入、制御された発現

製品ラインJump-In

製品タイプCHO-K1 Kit

数量1キット

選択剤（真核生物）Geneticin™（G-418）、ハイグロマイシン、ブラストサイジン

フォーマットキット

プロモーターCMV/TO

VectorpJTI™ R4 DEST CMV TO pA、pJTI™ R4 Int

Unit SizeEach

組成および保存条件

Jump-In™ T-REx™ CHO-K1細胞（2バイアル、各1 mL）、液体窒素で保存
pJTI™ R4 DEST CMV TO pAベクター（100 µg）、-20℃で保存
pJTI™ R4 Intベクター（100 µg）、-20℃で保存

よくあるご質問（FAQ）

Why is sequential transfection recommended over co-transfection in the T-REx and GeneSwitch systems?

When a co-transfection is performed, there is no way of testing the double stable cell line for functional TetR or GeneSwitch protein, respectively. On the other hand, when sequential transfection is performed, one can functionally test the generated T-REx or GeneSwitch cell line by transiently transfecting the lacZ expression control plasmid and then picking a clone that shows the lowest basal level of expression of lacZ in the absence of the inducer, and the highest level of lacZ in the presence of the inducer. This clone can then be expanded and used to transfect the T-REx or GeneSwitch expression construct, as the case may be.

What is the main advantage of the GeneSwitch system over the T-REx system? And what is its main disadvantage?

With the GeneSwitch system, it is possible to have the absolute lowest basal levels of expression of the gene of interest, whereas the T-REx system may be a little leaky due to the inevitable presence of tetracycline in FBS. The induced level of expression in the GeneSwitch system can be even higher than that seen with the CMV promoter. The disadvantage of the GeneSwitch system is that the expression does not appear to switch off very easily in culture, although it has been demonstrated to function beautifully in transgenics. The T-REx system, on the other hand, can be switched on and off by the addition and removal of the inducer.

What is the advantage of the Flp-In T-REx system over the T-REx system?

The Flp-In T-REx system combines the targeted integration offered by the Flp-In system with the powerful inducible expression offered by the T-REx system. It allows generation of isogenic, inducible, stable cell lines and permits polyclonal selection of these cell lines. Once the Flp-In T-REx host cell line containing an integrated FRT site has been created, subsequent generation of Flp-In T-REx cell lines expressing the gene(s) of interest is rapid and efficient.

Can I use doxycycline instead of tetracycline as an inducer in the T-REx system?

Doxycycline may be used as an alternative inducing agent in the T-REx system. It is similar to tetracycline in its mechanism of action, and exhibits similar dose-response and induction characteristics as tetracycline in the T-REx system. Doxycycline has been shown to have a longer half-life than tetracycline (48 hours vs. 24 hours, respectively). We do not offer doxycycline, but it may be obtained from Sigma (Cat. No. D9891).

I am interested in a mammalian expression system where I can have regulated expression of my gene of interest. I see that you offer multiple systems for this purpose. Can you describe the main features of each system?

We offer three unique mammalian expression systems for inducible/regulated expression of the gene of interest:

- T-REx system
- Flp-In T-REx system
- GeneSwitch system

Please see below to see how they compare with one another:
System -- Basal Expression Level -- Induced Expression Level -- Response time to Maximal Expression -- Transgenic Appliation
T-Rex system -- Low -- Highest -- High -- Suitable
Flp-In T-REx system -- Lower -- High -- 24-48 hrs -- Suitable
GeneSwitch system -- Lowest -- High -- 24-48 hrs -- Suitable