GeneArt™ Type IIs Assembly Kit, Bbs I

GeneArt™タイプIIsアセンブリキット、Bbs Iは、単一反応での開裂とライゲーションを同時に行うことにより、最大8個のDNAフラグメントのシームレスなクローニングとアセンブリを行います。このキットは、タイプIIs制限酵素Bbs Iを用いるゴールデンゲートクローニングと同様の技術を使用しており、あらかじめ決められた順序で複数のフラグメントを互換性のあるベクターにアセンブルするために使用できます。タイプIIsアセンブリは相同組換えに基づいていないため、再配列のリスクが最小限に抑えられ、最終的なコンストラクトのシーケンス確認も最小限で済みます。

このキットは3種類のバージョンがあり、それぞれ異なるタイプIIs制限酵素（Aar I、Bsa I、またはBbs I）が付属しています。すべてのバージョンに、オールインワン酵素ミックス、クローニングベクター、クローニングコントロールが含まれています。当社のGeneArt™プライマーおよびコンストラクト設計ツールは、フラグメントに適したGeneArt™アセンブリキットを決定するために使用する必要があります。コンストラクトを設計し、必要に応じてプライマーを作成および注文するための、使いやすいインターフェイスを提供しています。

• 複数のDNAフラグメントを、傷のない任意の適合ベクターに任意の順序でアセンブルできます
• 相同性クローニングまたは反復配列時には、相同組換えおよび関連する再配列を防ぎます
• TAL、遺伝子変異、および反復配列のアセンブリに使用します
• カスタムベクター成分を使用して、独自のクローニングベクターおよび発現ベクターを作成できます
• 最終的なコンストラクトの配列確認を最小限に抑えます
• 3種類のタイプIIs酵素から選択できます

タイプIIsクローニング
GeneArt™タイプIIsクローニングはシンプルな2ステップのプロセスで、in vitroアセンブリ反応とコンピテント大腸菌への形質転換を行います。タイプIIS制限エンドヌクレアーゼBbs Iは、非対称DNAシーケンシングを認識し、Bbs I認識部位から定義された距離でDNA分子を切断します。フラグメントの消化によって認識部位が除去され、シームレスにライゲーションできる相補的オーバーハングが生成されるよう、DNAフラグメントの末端をBbs I制限部位に並ぶ形で設計できます。これによって、元の部位を持たないジャンクションが作成されます。このキットには、この方法に合わせて最適化されたpType IIsと呼ばれるデスティネーションベクターが含まれています。

効率良く、柔軟に、正確にクローニング
GeneArt™タイプIIsアセンブリキットを使用した場合にクローニング効率に影響を与える主な要因は、DNA因子のサイズ、最終分子の総サイズ（10 kb）、およびフラグメントの品質と特異性です。

pType IIsに異なる数のフラグメントをクローニングした場合の、一般的なクローニング効率は以下のとおりです。

• 5フラグメント、それぞれ1 kbの場合>95%
• 8フラグメント、それぞれ1 kbの場合>60%
• それぞれ1 kbの同一フラグメント2個の場合>85%

in silicoクローニング設計サポート
GeneArt™タイプIIsクローニングの主なステップは、適切な認識部位と間隔を持つフラグメントおよびオリゴを正しく設計し、クローンの確実なアセンブリを支援することです。設計プロセスを簡素化および迅速化するために、当社はGeneArt™プライマーおよびコンストラクト設計ツールを提供しています。このツールは、お客様のin silicoでの実験の設計をサポートします。このツールは、お客様のアセンブリに適したGeneArt™キットを推奨し、実験の設計と製品仕様との互換性を確認し、必要に応じてDNAオリゴを設計します。また、ベクターのグラフィック表示、およびVectorNTI™ソフトウェアと互換性のあるGenBankフォーマットのダウンロード可能な注釈付きシーケンスをユーザーに提供します。

その他の推奨製品：

• Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキット、コンピテントセルなし（カタログ番号450245）
• Zero Blunt™ TOPO™ PCRクローニングキット、One Shot™ TOP10ケミカルコンピテント大腸菌（カタログ番号K280020）
• One Shot™ MAX Efficiency™ DH10B™ T1ファージ耐性細胞（カタログ番号12331-013）