GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit
Invitrogen™

GeneArt™ CRISPR Nuclease Vector with OFP Reporter Kit

GeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクター、OFPレポーターキット付きは、オレンジ蛍光タンパク質(OFP)レポーターを持つ哺乳類細胞のCRISPR/Cas9ゲノム編集に必要な機能成分を発現するベクターシステムです。OFPレポーターは、蛍光ベースでトランスフェクション効率の追跡、およびFACSベースのCas9とCRISPR発現細胞の分類/濃縮を可能にします。リニア化されたGeneArt™詳細を見る
製品番号(カタログ番号)数量
A2117410 reactions
製品番号(カタログ番号) A21174
価格(JPY)
293,800
Each
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数量:
10 reactions
GeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクター、OFPレポーターキット付きは、オレンジ蛍光タンパク質(OFP)レポーターを持つ哺乳類細胞のCRISPR/Cas9ゲノム編集に必要な機能成分を発現するベクターシステムです。OFPレポーターは、蛍光ベースでトランスフェクション効率の追跡、およびFACSベースのCas9とCRISPR発現細胞の分類/濃縮を可能にします。リニア化されたGeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクターは、二本鎖オリゴヌクレオチドを迅速かつ効率的にクローニングする方法を提供します。この方法では、目的のターゲットを表すcrRNAを、Cas9ヌクレアーゼのシーケンス特異的なターゲット化を可能にする発現カセットにコード化します。コンピテントセル付きのバージョンもご用意しています(カタログ番号A21178)。

GeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクターシステムは以下を提供します:
•簡単に設計できるゲノムエンジニアリングシステム
• 低価格ですぐに使用できるクローニングベクター
• 遺伝子導入が困難または変更が困難な細胞株の濃縮

CRISPRベースのゲノム編集に対応するオールインワンベクターシステム
GeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクターキットは、シンプルですぐに使用可能な、Cas9ヌクレアーゼ発現カセットとガイドRNA(gRNA)クローニングカセットの両方で構成されるオールインワン発現ベクターシステムを提供し、標的特異的CRISP R RNA(crRNA)をコード化するDNAの迅速かつ効率的なクローニングを実現します。このシステムでは、単一のプラスミドからシーケンス固有の方法で、選択したゲノム遺伝子座を編集および操作できます。高速かつ使いやすいGeneArt™ CRISPRベクターを用いて関連するターゲットを同定した後、生物学的に関連する変異をGeneArt™ Precision TALで正確に作成でき、特異性が高く、オフターゲット効果が低減します。

CRISPR gRNA設計のサポートが必要ですか?
当社の新しいCRISPR研究および設計ツールを使用すると、ヒトおよびマウス遺伝子に含まれる600,000を超える設計済みCRISPR gRNAのデータベースを検索したり、当社の特許取得済みアルゴリズムを使用してde novo gRNAデザインを行う対象の配列を解析できます。CRISPR配列は遺伝子ノックアウト用に最適化されており、各遺伝子の最初の3つの転写エクソンを標的にします。検索結果には、PAM部位を含む上位6つのCRISPR配列、gRNA結合部位を含むエクソンマップ、および各CRISPR配列の潜在的なオフターゲット結合部位が含まれます。このツールは、GeneArt™ CRISPRヌクレアーゼベクター用のオリゴなど、ご希望のCRISPR-Cas9製品に適したgRNAフォーマットを設計します。今すぐ設計を始める >
研究用途にのみご使用ください。診断目的には使用できません。
仕様
クローニング法制限酵素/MCS
フォーマットキット
反応数10反応
オーバーハング3'オーバーハング
製品ラインGeneArt
製品タイプofPレポーターキットを用いたCrisprヌクレアーゼベクター
プロモーターU6、CMV
タンパク質タグOFP融合
数量10 reactions
レポーター遺伝子OFP
原料オリゴ(DNA)
対応可能対象10反応
技術CRISPR-Cas9
検出法PCR
使用対象(アプリケーション)遺伝子発現解析, Cloning
形状液体
反応速度高速
Unit SizeEach
組成および保存条件
内容:
•CRISPR OFPヌクレアーゼベクター、線形化
• 10Xオリゴヌクレオチドアニーリングバッファー
• DNase/RNaseフリー水
• 5Xライゲーションバッファー
• T4 DNAリガーゼ
• U6フォワードシーケンシングプライマー
• コントロール二本鎖オリゴヌクレオチド

フリーザー(-5~-30℃)で保存してください。

よくあるご質問(FAQ)

2種類のCRISPR vectorの特徴や違いは?

OFP vectorの場合はFACSで細胞を濃縮できます。一方、CD4 vectorの場合はDynabeadsでFACSを用いなくても細胞を濃縮することが可能です。

indel%の計算方法は?

indel(%)=1-((1-fraction cleaved))1/2)の式で計算できます。Fraction cleavedの数値は切断された2本のバンドの合計の割合になります。例えば、2本のバンドの濃さが25%と32%の場合、fraction cleavedは0.57となります。

TALsを使用する前にCRISPRを用いてスクリーニングすることは可能ですか?

切断効率は標的配列へのアクセスのし易さ、クロマチン構造および配列に依存しますので、CRISPRの場合は標的配列の19塩基または20塩基を組み替えるだけで構築できますので目的の遺伝子の複数の標的をテストすることを推奨いたします。スクリーニング後、効率の良い配列を迅速に確認して、特異性の高いTALsで変異体を作成することも可能です。

標的配列をデザインする時の参考マニュアルは?

下記のパンフレットをご参考下さい。http://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/global/life-sciences/synthetic-biology/pdfs/0913/CRISPR%20Technical%20Product%20Bulletin%20(Global)_FLR.pdf

一つのVectorに複数の標的配列をクローニングすることは可能ですか?

弊社のCRISPR vectorは1つのターゲットのみクローニングできます。そのため複数の標的配列をお考えの場合、標的配列の数だけvectorにクローニングする必要があります。また複数のCRISPR vectorをco transfectionすることは可能です。

引用および参考文献 (1)

引用および参考文献
Abstract
Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.
Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,
Journal:
PubMed ID:26003884
'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More