Annexin V Conjugates for Apoptosis Detection
Annexin V Conjugates for Apoptosis Detection
Citations & References (15)
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Annexin V Conjugates for Apoptosis Detection

アネキシンVスタンドアロンAlexa Fluor、APC、Pacific Blue、PE、FITC、およびフローサイトメトリーを使用したビオチンコンジュゲートでアポトーシスの初期段階を検出します。
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製品番号（カタログ番号）励起／発光フローサイトメーターレーザーラインコンジュゲート
A35110650/660633～637APC（アロフィコシアニン）
A13201495／519488Alexa Fluor 488
A13199494／518488FITC
A13202578／603532、561Alexa Fluor 568
A13203590／617532Alexa Fluor 594
A13204ビオチン-X
A23202346／442UVAlexa Fluor 350
A23204650／665633～637Alexa Fluor 647
A35108555／565532、561Alexa Fluor 555
A35109679／702633～637Alexa Fluor 680
A35111565/578488、532、561PE
A35122410／455405Pacific Blue
製品番号（カタログ番号） A35110
価格（JPY）
118,700
Each
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励起／発光:
650/660
フローサイトメーターレーザーライン:
633～637
コンジュゲート:
APC（アロフィコシアニン）
アポトーシス検出用のアネキシンVスタンドアロンコンジュゲートにより、初期の細胞アポトーシスを迅速かつ信頼性の高い方法で検出できます。アネキシンVコンジュゲートは、フローサイトメトリーを用いたアポトーシス細胞と非アポトーシス細胞の蛍光シグナル強度の差を最大100倍にします。
アネキシンVはホスファチジルセリン（PS）に対する高い親和性を有しており、アポトーシスを受けている細胞の外側のリーフレットに曝露されます。この親和性により、蛍光標識アネキシンV試薬はアポトーシス研究で一般的に使用されます。

アネキシンVコンジュゲートは、アポトーシスの中間期指標であるホスファチジルセリンの外在化を研究するための迅速で信頼性の高い検出法を提供します。フローサイトメトリーで測定した当社の蛍光アネキシンVコンジュゲートで染色したアポトーシス細胞と非アポトーシス細胞の蛍光強度の差は、通常約100倍です。

Nexins Research社との提携により、当社はAlexa Fluor 350、488、555、568、594、647および680アネキシンVコンジュゲート、アネキシンV APC、Biotin-X、FITC、Pacific Blue、およびPEコンジュゲートなどの最高レベルのアネキシンVコンジュゲート提供します。蛍光性の高いアネキシンVコンジュゲートは、アポトーシスの初期指標の1つであるホスファチジルセリンの外在化を研究するための迅速で信頼性の高い検出法を提供します。

アネキシンV Pacific Blueコンジュゲートはバイオレット励起性であり、バイオレットレーザーを備えた装置や、緑色または赤色蛍光色素を含むマルチカラー実験に最適です。

当社のアネキシンVコンジュゲートの利点：
•より明るいシグナルを得るためのInvitrogen Alexa FluorおよびeFluor色素に対するコンジュゲート
•利用可能なすべてのレーザー用のコンジュゲート
•独立した試薬または使いやすいキットとして利用可能

アポトーシス細胞を検出するためのアネキシンV染色は、生細胞および組織でのみ可能です。サンプルを染色後に固定する場合は、シグナルの一時的な保持を実現するために特定の条件が必要です。これには、アルコールを含まないアルデヒドベースの固定法の使用、Ca2+を含むバッファーの使用、界面活性剤／界面活性剤（洗剤）の回避などが挙げられます。また、アポトーシスアッセイにおけるホスファチジルセリンとアネキシンVとの結合を促進する濃縮アネキシン結合バッファーもご用意しています。

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
仕様
色Red
概要アネキシンV、APCコンジュゲート（APCアネキシンV）（アネキシン産物-アネキシンV05の代替）
励起／発光650/660
フローサイトメーターレーザーライン633～637
使用対象 (装置)フローサイトメーター
キット内容1バイアルのアネキシンV、APCコンジュゲートを含みます。
反応数50
製品タイプアネキシンVコンジュゲート
数量250 μL
出荷条件湿氷
コンジュゲートAPC（アロフィコシアニン）
Unit SizeEach
組成および保存条件
冷蔵庫（2℃～8℃）に保存し、遮光してください。

よくあるご質問（FAQ）

I trypsinized my adherent cells and labeled with annexin V, and now my flow data is showing a high percentage of apoptotic cells even for control, untreated cells. What is the problem?

Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. Allow the cells to recover for about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium after trypsinizing/scraping so that they can recover their membrane integrity before staining. For lightly adherent cell lines, such as HeLa and NIH 3T3, another option is to use non-enzyme treatments like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I detect annexin V staining in an imaging assay?

Annexin V staining is not typically used in imaging experiments; it is a better reagent for flow cytometry analysis. All cells will stain to some extent, so it can be difficult to distinguish a relatively bright annexin V-stained cell from a dimmer non-apoptotic cell. Caspase activation, detected using our CellEvent Caspase 3/7 or Image-iT LIVE Caspase detection kits, is a better method for detecting apoptosis in an imaging assay.

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When should I stain adherent cells with annexin V for flow cytometric analysis? Before or after I trypsinize them?

Trypsinize first and then allow the cells to recover about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium before staining with annexin V conjugates. Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing for annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. For lightly adherent cell lines such as HeLa and NIH 3T3, you could use a less harsh (non-enzymatic) dissociation product like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I fix my cells after annexin V labeling?

Annexin V staining is best analyzed on live cells. If you need to fix your cells for analysis, then fix in 3.7% formaldehyde in PBS containing calcium and magnesium to maintain binding during fixation. The signal will not be retained after permeabilization, thus annexin V staining is not compatible with internal antibody labeling.

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I am trying to label adherent cells with annexin V and am finding that everything is getting labeled. How can I fix this?

Treating cells with trypsin or other reagents to detach adherent cells causes damage to the membrane, such that cells will be labeled with annexin V. The best way to avoid this problem is to allow your cells to recover for 30-45 min in the incubator. Swirl the tube/plate/flask every few minutes to prevent re-attachment. After this recovery period, you can label your cells with annexin V and analyze by flow cytometry.

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引用および参考文献 (15)

引用および参考文献
Abstract
Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Haskó G, Hawkins BJ, Madesh M, Pacher P
Journal:Nat Protoc
PubMed ID:17853886
'Annexin V and Sytox Green are widely used markers to evaluate apoptosis in various cell types using flow cytometry and fluorescent microscopy. Recently, a novel fluoroprobe MitoSOX Red was introduced for selective detection of superoxide in the mitochondria of live cells and was validated for confocal microscopy and flow cytometry. ... More
Cathepsin D and H2O2 stimulate degradation of thioredoxin-1: implication for endothelial cell apoptosis.
Authors:Haendeler J, Popp R, Goy C, Tischler V, Zeiher AM, Dimmeler S
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16263712
'Cathepsin D (CatD) is a lysosomal aspartic proteinase and plays an important role in the degradation of proteins and in apoptotic processes induced by oxidative stress, cytokines, and aging. All of these stimuli are potent inducers of endothelial cell apoptosis. Therefore, we investigated the role of CatD in endothelial cell ... More
Role of superoxide, nitric oxide, and peroxynitrite in doxorubicin-induced cell death in vivo and in vitro.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Bátkai S, Kashiwaya Y, Haskó G, Liaudet L, Szabó C, Pacher P,
Journal:Am J Physiol Heart Circ Physiol
PubMed ID:19286953
'Doxorubicin (DOX) is a potent available antitumor agent; however, its clinical use is limited because of its cardiotoxicity. Cell death is a key component in DOX-induced cardiotoxicity, but its mechanisms are elusive. Here, we explore the role of superoxide, nitric oxide (NO), and peroxynitrite in DOX-induced cell death using both ... More
FTY720 increases CD74 expression and sensitizes mantle cell lymphoma cells to milatuzumab-mediated cell death.
Authors:Alinari L, Mahoney E, Patton J, Zhang X, Huynh L, Earl CT, Mani R, Mao Y, Yu B, Quinion C, Towns WH, Chen CS, Goldenberg DM, Blum KA, Byrd JC, Muthusamy N, Praetorius-Ibba M, Baiocchi RA,
Journal:Blood
PubMed ID:22042694
'Mantle cell lymphoma (MCL) is an aggressive B-cell malignancy with a short median survival despite multimodal therapy. FTY720, an immunosuppressive drug approved for the treatment of multiple sclerosis, promotes MCL cell death concurrent with down-modulation of phospho-Akt and cyclin D1 and subsequent cell-cycle arrest. However, the mechanism of FTY720-mediated MCL ... More
Flow cytometry-based apoptosis detection.
Authors:Wlodkowic D, Skommer J, Darzynkiewicz Z,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19609746
'An apoptosing cell demonstrates multitude of characteristic morphological and biochemical features, which vary depending on the stimuli and the cell type. The gross majority of classical apoptotic hallmarks can be rapidly examined by flow and image cytometry. Cytometry thus became a technology of choice in diverse studies of cellular demise. ... More
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