Alexa Fluor™ 488 TFP ester

Alexa Fluor™色素は、タンパク質の一級アミン（R-NH2）、アミン修飾オリゴヌクレオチド、およびその他のアミン含有分子を蛍光標識するために使用できる反応性分子です。結果として生じるAlexa Fluor™コンジュゲートは、スペクトル的に類似した他のフルオロフォアコンジュゲートよりも明るい蛍光と、より高い光安定性を発揮します。Alexa Fluor™ 488 TFP esterは、フルオレセイン（FITC）およびCy2コンジュゲートとスペクトル的に類似した495／515 nmの励起／発光を持つコンジュゲートを生成します。

Alexa Fluor™色素の蛍光発光は可視および近赤外線スペクトルにおよびます（Molecular Probes™ハンドブックの「Alexa Fluor Dye™シリーズ— 注記1.1」を参照）。この色素は水溶性で、pH 4～10ではpHの影響を受けないため、さまざまな生物学的環境への適合性を実現しています。

TFP（テトラフルオロフェニル）エステルは、フルオロフォアまたはハプテンを生体分子の一級アミンに付加するために一般的に使用されるスクシンイミジルエステル（SEまたはNHSエステル）化学に比べて改良されています。どちらの反応化学も、色素またはハプテンと対象化合物との間に強いアミド結合を同じように形成しますが、TFPエステルは結合反応中の自然発生的加水分解の影響を受けにくくなっています。Alexa Fluor™ TFP esterは、反応に一般的に使用される塩基性pHで数時間安定しており、これはスクシンイミジルエステルをはるかに上回ります。

標準的な結合反応
アミン反応性試薬をほぼあらゆるタンパク質またはペプチドと結合させることができます（提供されているプロトコルはIgG抗体用に最適化されています）。任意の量のタンパク質に合わせて反応規模を調整できますが、最適な結果を得るにはタンパク質の濃度を2 mg/mL以上にする必要があります。反応試薬とタンパク質の3つのモル比を使用して、3つの異なる標識度を試すことが推奨されます。

Alexa Fluor™ TFP esterは通常、高品質の無水ジメチルスルホキシド（DMSO）（D12345）に溶解し、0.1～0.2 Mの重炭酸ナトリウムバッファー（pH 8.3）中で室温で1時間反応させます。末端アミンのpKaはリジンのエプシロンアミノ基のpKaよりも低いため、中性pHに近いバッファーを使用するとアミン末端をより選択的に標識できます。

コンジュゲート精製
標識抗体は通常、Sephadex™ G-25、BioGel™ P-30、または同等のゲルろ過カラムを使用して、遊離Alexa Fluor™色素から分離できます。タンパク質のサイズが大きい場合や小さい場合は、適切な分子量分画のゲルろ過培地を選択するか、または透析により精製してください。

タンパク質および標識抗体の詳細
当社は、 お客様の出発物質および実験のセットアップに適したMolecular Probes™抗体およびタンパク質標識キットを幅広く提供しています。その他の選択肢は、当社の「抗体標識キット」をご覧になるか、当社の「標識化学選択ツール」をご利用ください。標識キットの詳細については、Molecular Probes™ハンドブックのタンパク質および核酸の標識キット—セクション1.2をご覧ください。

当社では、お客様に合わせてカスタムコンジュゲートを実施
当社のオンラインカタログで目的の製品が見つからない場合は、カスタム抗体またはタンパク質コンジュゲートをご用意します。当社のカスタム結合サービスは効率的かつ機密性が確保され、ISO 9001:2000認証を取得しています。