EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-Desthiobiotin, No-Weigh™ Format

Thermo Scientific EZ-Linkスルホ-NHS-LC-デスチオビオチンは、ストレプトアビジンからビオチン様基を溶出できる長鎖アミン反応性標識試薬で、精製または細胞表面タンパク質の標識および精製に最適です。

EZ-Linkスルホ-NHS-LC-デスチオビオチンの特長：

•デスチオビオチン—ビオチンのデスチオビチニアナログにより、ストレプトアビジンから簡単に溶出できるため、アフィニティー精製アプリケーションに最適です
• タンパク質標識—精製サンプルまたは混合サンプル中の抗体またはタンパク質をタグ付けし、ストレプトアビジンビーズを用いたプルダウンアッセイで高い回収率を実現します
• 細胞表面標識—負電荷を持つ試薬は細胞膜を通過しないため、細胞全体の表面タンパク質のみを修飾します
• アミン反応性—リジン側鎖またはポリペプチドのアミノ末端などの第一級アミン（-NH2）と反応します
• 可溶性—荷電スルホNHS基によって、一般的なNHSエステル化合物に比べて試薬の水溶性が向上します

スルホ-NHS-LC-デスチオビオチンは、ビオチンの変異体で、長鎖（LC）スペーサーアームを持つスルホ-NHSエステルとして活性化され、デスチオビオチン基でタンパク質またはその他の分子の第一級アミン（-NH2）を共有結合的に標識します。このデスチオビオチンタグは、ストレプトアビジンやその他のビオチン結合タンパク質に高い特異性を持って結合するものの、穏やかな条件（すなわち、通常の遊離ビオチンとの競合的な置換）で容易に溶出します。そのため、この試薬は、標識タンパク質の非変性溶出が必要なアビジン-ビオチン法における Sulfo-NHS-LC-ビオチン （製品番号21335）の代替として有用です。負電荷を持つスルホ-NHS基は、この試薬が細胞膜を通過するのを防ぎます。そのため、スルホ-NHS-LC-デスチオビオチンを使用すると、無傷細胞の細胞表面タンパク質の標識を限定することができます。No-Weighフォーマット（5×1 mg再密封可能バイアル）は、少量の試薬の計量に伴う困難を解消し、未使用の試薬を加水分解から最大限保護します。

デスチオビオチンとビオチン
デスチオビオチン は、単環で硫黄フリーのビオチンのアナログ で、ストレプトアビジンへの結合特異性はビオチンとほぼ同等ですが、親和性はビオチンよりも低くなっています（それぞれ1/Kd=10¹¹と10¹⁵ M）。その結果、デスチオビオチン化ベイトタンパク質とその相互作用パートナーは、遊離ビオチンとの競合的な置換に基づいて、穏やかな条件でストレプトアビジンアフィニティー樹脂から簡単かつ特異的に溶出できます。また、生体サンプルを用いたプルダウンアッセイ実験では、デスチオビオチンのこうした穏やかな遊離特性により、遊離ビオチンを用いて標的タンパク質複合体を溶出した際に、ストレプトアビジンへの結合を維持した状態で、内因性ビオチン化分子の共精製を最小限に抑えることができます。また、修飾済みアビジン-ビオチンアフィニティーシステムにより、複合体の結合を解除したり、標的タンパク質や細胞を損傷したりする可能性のある厳しい溶出条件を用いる必要がなくなります。デスチオビオチンベースの手法は、融合タグで発現しない天然タンパク質や組換えタンパク質を使用する場合や、インタクトな細胞や細胞表面タンパク質を標的とするようなネイティブ条件下で捕捉タンパク質を分離する場合に最適です。

NHSエステル試薬による標識
ビオチンのN-ヒドロキシスルホスクシンイミド（NHS）エステル は、最も一般的なビオチン化試薬です。NHS活性化ビオチンは、アルカリ性バッファー中で１級アミノ基（-NH2）と効率的に反応して、安定したアミド結合を形成します。タンパク質は、典型的には、リジン（K）残基の側鎖および各ポリペプチドのN末端を含む、標識のための標的として利用可能ないくつかの一次アミンを有します。ほとんどのスルホ-NHSエステルは直接水溶性ですが、膜透過性はありません。プレーンNHSエステルは、水性バッファーへの溶解性は低いですが、膜透過性があります。