No-Stain™ Protein Labeling Reagent

Invitrogen No-Stain Protein Labeling Reagentは、ゲル中または（転写後の）メンブレン上のタンパク質を可視化し標準化するための柔軟、正確、かつ迅速で信頼性の高い方法を提供します。この試薬は10分以内に、ゲル中またはメンブレン上のタンパク質との共有結合を形成します。脱色ステップは不要で、一般的なイメージャーを使用して即時に可視化できます。No-Stain試薬は特定のゲルや他の試薬を必要とせず、ゲル染色やウェスタンブロッティングのワークフローに適合します。

ゲル中のタンパク質の即時可視化
クマシー染色や他のゲル染色、および脱色ステップは非常に時間と手間がかかる場合があります。No-Stain Protein Labeling Reagentは10分以内に、ゲル中のすべてのタンパク質のリジンアミノ酸側鎖と共有結合を形成します。リジンはもっとも豊富なアミノ酸の1つであるため、No-Stain試薬はゲル中またはメンブレン上のすべてのタンパク質の検出を可能にし、共有結合した試薬からの強いシグナル放出はナノグラムレベルの感度を実現します。

•従来のゲル染色試薬の代替—幅広いタンパク質溶解物濃度（1～80 µg）でより正確な標準化を実現
• 高感度—検出下限はバンドあたり20 ng
• 特異的—タンパク質のリジン側鎖とのみ結合。未結合の試薬は発光しないため、優れたシグナル／ノイズ比を実現
• 柔軟—染色していないゲルを得るためにゲルを替える必要がないため便利。No-Stain試薬はゲルを染色せず、あらゆるゲルタイプ（プレキャストまたは自家製ゲル）に使用できるという簡便性を提供

定量ウェスタンブロッティングのゴールドスタンダードを実現
タンパク質の標準化は、信頼性と再現性の高い定量ウェスタンブロッティングを得るための重要なステップです。総タンパク質の標準化は定量ウェスタンブロッティングのゴールドスタンダードと考えられています。多くの主要ジャーナルがウェスタンブロッティング研究の投稿に関するガイドラインを作成しており、これらのガイドラインからの抜粋を以下に示します。

•「定量的比較の場合、適切な試薬、コントロール、およびイメージング法と、併せて線形シグナル範囲を使用する必要があります」 – Nature
• 「データの取得方法、シグナル強度が抗原のローディング量に対して線形かどうか、タンパク質ローディング量の標準化方法を記録します」 – Journal of Biological Chemistry
• 「可能な限り、総タンパク質ローディング量に対するシグナル強度を標準化します（総タンパク質のメンブレン染色により評価）」 – Journal of Biological Chemistry
• 「操作が発現に影響しないことを示す証拠がない場合、ハウスキーピングタンパク質を標準化に使用すべきではありません」 – Journal of Biological Chemistry

正確なローディングコントロールは、すべての実験条件においてシグナル強度とサンプルロード間で直線関係を示すはずです。No-Stain試薬を使用したメンブレン上の総タンパク質標識から得たシグナル強度は、すべての実験条件下でシグナル強度とサンプルロードとの直線関係（下図参照）を確保します。そのため、定量ウェスタンブロッティングアプリケーションにNo-Stain試薬を使用することで、総タンパク質量を最適なローディングコントロールとして使用できます。

•使い易いプロトコル—ニトロセルロースまたはPVDF膜に10分以内にタンパク質を標識
• 迅速な可視化UVまたは蛍光光源を備えたさまざまなイメージャーを使用可能
• 正確な総タンパク質の標準化—1～80 μgのタンパク質の広域の検出直線範囲により、No-Stainのシグナルとターゲットタンパク質のシグナルを同時に検出し、正確な総タンパク質の標準化を行うことが可能
• 高感度かつ安定—ダウンストリームの免疫検出ステップに適合する安定したシグナルにより、ナノグラムレベルの感度を達成
• 卓越した分析—ハウスキーピングタンパク質は、シグナルの飽和やその他の生物学的変化の影響を受けやすいですが、No-Stain試薬を使用して総タンパク質の標準化を行った場合は、このような現象は見られません

非染色タンパク質標識試薬について詳しく見る ›