Applied Biosystems PureQuantアッセイは、混合細胞集団における特定の免疫細胞タイプを正確に同定および定量するアッセイのファミリーです。これらのアッセイはTaqMan qPCRベースであり、特定の部位におけるゲノムDNAメチル化を測定し、独自の識別子として機能します。アッセイには標準液とコントロール液が含まれ、各96ウェルプレートは、最大7つの試験サンプルに対応できます。結果はフリー解析ツールを使用して、総インプット細胞中のターゲット細胞タイプに対するパーセンテージとして得られます。
PureQuant CD3+アッセイは、イントラグニックCD3G/CD3D領域の特定の脱メチル化部位を利用して、CD3+ T細胞を陽性に同定します(
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3278789/を参照)。
主なメリット:
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実証済みの性能―コアテクノロジーは10年以上にわたり、免疫細胞タイプの同定および定量に使用されています
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簡単に標準化―qPCRメソッドは、複数のユーザー、機器、および部位において、一貫した結果を可能にします
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規制書類の提出が容易―ICHQ2(R1)ガイドラインに従って性能仕様を確立します
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柔軟なスケジューリング―アッセイは新鮮な、または凍結した細胞/gDNAを使用して実施できます
アッセイには、アッセイの実行に必要なすべての試薬、標準液、およびコントロールが含まれます。以下のコンポーネントが含まれます。
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キャリブレーター:バイサルファイト処理効率の変動を補正します。プラスミドベースのキャリブレーターは、等モル比でゲノムターゲット領域を保持し、GAPDHを含みます。バイサルファイト処理後、qPCR標準曲線によるコピー数推定を行います。アッセイ特異的バイサルファイト効率因子の推定を可能にします(同じプラスミドから測定されたTPG/GAPDHコピー数の比率)。
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参照:アッセイ性能をチェックします。プールされた健康なドナーのヒト血液から抽出されたゲノムDNAで構成されています。参照値は、ターゲット細胞タイプの予測範囲を表します。たとえば、CD8+細胞は通常、Treg細胞やTh17細胞よりも豊富です。
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標準: 不明なコピー数を決定します。4-logのリニアダイナミックレンジ(30~31250のコピー)の6種類の希釈液で構成されています。絶対コピー数は、それぞれの標準曲線の傾きと切片を使用して確実に決定できます。
この製品は、ISO9001 認証の品質マネジメントシステムを取得した施設で製造されています。