mMESSAGE mMACHINE™ SP6 Transcription Kit

mMESSAGE mMACHINE™キットは、キャップ構造を持つRNAをin vitroで大量に合成できるように設計されています。キャップ構造を持つRNAは、5'末端に7-メチルグアノシンのキャップ構造を持つため、ほとんどの真核生物にin vivoで見られるmRNAに似ています。mMESSAGE mMACHINE™キットの反応では、超高収量の転写反応でキャップアナログ［m⁷G（5'）ppp（5'）G］が付加されます。キャップアナログはその構造上、転写産物の1塩基目または5'末端のGの位置で取り込まれ、RNA分子の他の場所に取り込まれることはありません。

mMESSAGE mMACHINE™キットの動作原理
mMESSAGE mMACHINE™キットの反応フォーマットはシンプルであり、4種類のリボヌクレオチドとキャップアナログが、すべて単一の溶液で混合された状態になっています。キャップアナログとGTPの比率は4：1になっており、、RNAの収量およびキャップ構造の付加効率が最大になるよう最適化されています。mMESSAGE mMACHINE™キットは、卵母細胞へのマイクロインジェクション、in vitro翻訳、トランスフェクション、およびその他のアプリケーション用にキャップ構造を持つRNAをルーチンで合成するのに適しています。高収量は、高濃度のヌクレオチド存在下でのRNA合成の反応条件を最適化することで実現しています。さらに、キットに付属する酵素ミックスにはRNase阻害剤が添加されており、汚染されたリボヌクレアーゼによる分解から合成RNAを守ります。

mMESSAGE mMACHINE™キットの使用方法
mMESSAGE mMACHINE™高収量キャップRNA転写物は、2時間のインキュベーション、20 µLの反応により、キャップ構造を持つRNAを大量に産生します。これは従来のin vitro転写反応によって得られる収量の10～50倍の量に相当します。キャップアナログとGTPの割合は、収量（15～35 µg）およびキャップ構造を持つ転写産物の割合（80%）のバランスを配慮して、最適化されています。また、mMESSAGE mMACHINE™キットにはLiCl沈殿用の溶液が含まれており、LiCl沈殿によって、反応液中に残存するタンパク質および取り込まれなかったヌクレオチド（フリーのキャップアナログを含む）を効果的に分離し、翻訳の効率を上げることができます。mMESSAGE mMACHINE™キットは、キットに含まれるポリメラーゼを使用した場合に対してのみ最適化されています。その他のポリメラーゼを使用した場合は、収量が低下する可能性があります。mMESSAGE mMACHINE™キットには25回分の転写反応に必要なバッファーおよび試薬がすべて含まれています。キットに付属するコントロールテンプレート（ツメガエル伸長因子1α、pTRI Xef）を使用した場合、mMESSAGE mMACHINE™ T3またはT7のRNAポリメラーゼでは約20～30 µgのRNAの合成が見込まれ、SP6のRNAポリメラーゼでは約15～25 µgのRNAの合成が見込まれます。