Cells-to-cDNA™ II Kit
Cells-to-cDNA™ II Kit
Invitrogen™

Cells-to-cDNA™ II Kit

Ambion Cells-to-cDNA™ IIキット(特許出願中)は、培養哺乳類細胞からのcDNAを2時間以内に生成します。RNAの単離は不要です。このキットは、100反応分に十分な試薬が含まれており、少数の細胞詳細を見る
製品番号(カタログ番号)反応数
AM1723100 reactions
AM172240 reactions
製品番号(カタログ番号) AM1723
価格(JPY)
110,000
Online offer
Ends: 27-Mar-2026
183,400
割引額 73,400 (40%)
Each
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反応数:
100 reactions
Ambion Cells-to-cDNA™ IIキット(特許出願中)は、培養哺乳類細胞からのcDNAを2時間以内に生成します。RNAの単離は不要です。このキットは、100反応分に十分な試薬が含まれており、少数の細胞、多数の細胞サンプルに対して逆転写反応を行いたい場合、またはRNA単離に不慣れな科学者に最適です。

•RNAの浄化は不要です
• 2時間以内に培養中の細胞からcDNAへ
• わずか1セルで希少なメッセージを検出
• RNA単離のための設備がないラボに最適です

RT-PCRアプリケーションに最適
Cells-to-cDNA IIキット(特許出願中)は、RNase不活性化およびDNase I処理をRT-PCR対応の細胞溶解バッファーに統合し、RNA単離が完全に不要になります。ほとんどの細胞溶解バッファーには強力な変性剤が含まれており、これを酵素反応に加えると、ほとんどの酵素が阻害または不活性化されます。強力な変性剤が含まれていない溶解バッファーを使用すると、内在性RNaseは迅速に細胞RNAを分解できます。Cells-to-cDNA™ IIキットには、ダウンストリームの酵素反応を損なうことなく内在性RNaseを不活性化する新しい細胞溶解バッファーが含まれています。RNaseの不活性化後、細胞ライセートをcDNA合成反応に直接加えることができます。Cells-to-cDNA™ IIは、ワンステップおよびツーステップのRT-PCRプロトコルの両方に対応しています。
定量的—直線的な結果と検出可能なDNA汚染なし
入力細胞数におけるバリエーションに対してCells-to-cDNA™ IIの定量的で直線的な反応を示すために、ABI 7700 シーケンス検出システムを使用してリアルタイムな定量的RT-PCR実験を実施しました。プロッティングサイクルしきい値(Ct)とGAPDHの細胞濃度の比較により、0.99の相関性を持つ標準曲線が得られました。したがって、Cells-to-cDNA™ IIは、リアルタイムRT-PCRツーステップアッセイで1~10,000個の細胞/µLの直線的な結果をもたらします。また、GAPDH実験のためのマイナステンプレートPCRコントロールがネガティブで、ゲノムDNAが完全に除去されたことを示していることにも留意する必要があります。
シンプルな手順
このキットには、培養細胞からPCRに対応したcDNAに2時間以内に移動するために必要なすべてのものが含まれており、RNAの単離は不要です。細胞はまずPBSで洗浄し、次に細胞溶解バッファーで再懸濁します。短時間加熱すると細胞が同時に溶解し、RNaseが不活性化します。その後、必要に応じてDNase消化を行い、ゲノムDNAを分解し、その後に熱不活性化ステップを行います。その後、細胞ライセートの一部を、付属の試薬を用いた逆転写反応で使用しますAM2050AM2052):
SuperTaq™熱安定性Taq DNAポリメラーゼが推奨されており、単品で販売されています(SKU# AM2050およびAM2052)。1 kbを超える断片の最適な増幅には、SuperTaq Plus熱安定性Taq DNAポリメラーゼ(SKU# AM2054およびAM2056)を使用します。
研究用にのみ使用できます。診断用には使用いただけません。
仕様
最終産物タイプcDNA
反応数100 reactions
最適反応温度42°C
製品ラインAmbion、Cells-to-cDNA
精製時間2 hr.
数量100 reactions
逆転写酵素M-MLV
サンプルタイプMammalian Cells
出荷条件ドライアイス
サイズ(最終製品)7 kb or less
使用対象(アプリケーション)Real Time PCR (qPCR), RT-PCR
Unit SizeEach
組成および保存条件
1X PBS、Cell Lysis II Buffer、µL DNase 1、10X RT Buffer、M-MLV Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor、dNTP Mix、Random Decamers、Oligo(dT)18 Primers、Armored RNA™ Control、Armored RNA™ Primer Pair、Endogenous Primer Pairは
-20°Cで保存する必要があります。ヌクレアーゼ不含の水は、任意の温度で保存できます。

よくあるご質問(FAQ)

I'm seeing PCR products in the minus-RT control after performing my Cells-to-CT experiment. What does this mean?

If PCR products are seen in the minus-RT control reaction, but not in the no-template control, it indicates that genomic DNA remains in the sample and that genomic DNA was amplified in real-time PCR. Please follow the suggestions below:

- Ensure the DNase I is mixed thoroughly into the Lysis Solution.
- Use fewer cells per lysis reaction.
- Lyse cells using Lysis Solution that is at room temperature, and make sure that the lysis reaction occurs at room temperature.
You can also try increasing the incubation time of the lysis reaction to 8 minutes and/or using Lysis Solution that has been warmed up to 25 degrees C for cell lysis.

I'm getting PCR products in the no-template PCR control when performing a Cells-to-CT experiment. What could cause this?

PCR products in the no-template PCR control indicate that the sample is contaminated with DNA. More stringent steps need to be taken to control contamination.

I'm getting no PCR product or unexpected PCR products after performing a Cells-to-CT experiment. What could be the cause of this?

Please review the following possibilities and suggestions:

- A problem with adding or mixing the Stop Solution: ensure that the Stop Solution was added directly to the lysate, as components of the Lysis Solution may inhibit RT-PCR if not fully inactivated.
- The RNA was degraded: keep cells in PBS on ice before starting the cell lysis procedure.
- RNase in the sample was not completely inactivated: Too many cells could have been used or too much PBS left on the cells, diluting the lysis solution.
- The lysates sat too long before going to room temperature: Do not allow lysates to sit longer than 20 minutes at room temperature once the Stop Solution has been added.
- The sample does not contain the target RNA: Verify that the procedure is working by using the XenoRNA Control in the sample. Also check that your PCR primers can amplify your target under the PCR conditions you are using.

I ran out of stop solution for my Cells-to-CT experiment. Can I purchase it separately?

Yes, it is available in 1 mL aliquots (Cat. No. 4402960).

I have genomic DNA contamination in my Cells-to-CT reaction. How do I get rid of it?

1. Ensure that all medium is removed from the wells.
2. Wash with an equal volume of room temperature 1X PBS after the medium is removed.
3. Ensure that the reaction happens at room temperature (the lysis reaction may not reach room temperature if the plate is on ice, if the plate was quickly moved to the bench, or if a cold lysis solution was added).
4. Warm lysis solution to room temperature before adding to cells.
5. Allow the lysis reaction to proceed for 8 minutes at 25 degrees C.