PARIS™ Kit

Ambion™ PARIS™システムは、同一の実験用サンプルから、RNAと天然型タンパク質の両方を単離します。また、RNAやタンパク質の単離の前に、核分画と細胞質分画を分離することもできます。このキットには、1～75 mgの組織または100～10⁷個の細胞から50回の精製を行うのに十分な試薬が含まれています。

•迅速でシンプルな手順
• 培養細胞から核内RNAと細胞質RNA、およびタンパク質を単離できます
• 培養細胞または組織からトータルRNAおよびタンパク質を単離できます
• フェノール抽出やアルコール沈殿は不要です
• 時間とコストを節約し、独立した実験サンプル間のばらつきを低減します

さまざまな遺伝子発現解析において最初のステップとなるのが、高品質RNAの単離です。多くの場合、タンパク質レベルでの補足研究も必要です。通常、これらの分析は同じ実験サンプルの異なるアリコートを使用して行われます。ただし、希少なサンプル、入手が困難なサンプル、または非常に少量のサンプルを扱う場合は、RNAと天然型タンパク質を単独で分離することは現実的ではない場合があります。多数のサンプル、高価な試薬、または本質的な変動性（細胞のトランスフェクションなど）を伴う研究では、独立した実験サンプルを追加することにより、コストと時間がかかるだけでなく、一貫性のない結果につながる可能性もあります。このような問題を解決するために、Protein and RNA Isolation System（PARIS™システム）が開発されました。このシステムでは、同一の実験用サンプルからRNAとタンパク質の両方を単離できます（図を参照）。PARIS™システムを使用することで、RNAとタンパク質を全細胞ライセートから同時に単離できます。また、RNAとタンパク質を別々の核分画および細胞質分画から単離することもできます。組織細胞または培養細胞は、最初に氷冷の細胞破壊バッファーでホモジナイズし、全細胞ライセートを調製します。ホモジナイゼーションは、氷上や界面活性剤の存在下で迅速に行われるため、タンパク質とRNAの両方をこのライセートから直接精製できます。RNA単離では、全細胞ライセートの一部を同等量の溶解／結合溶液と直ちに混合します。その後、RNA結合ガラス繊維フィルターを使用して、混合物からトータルRNAを精製します。3つの迅速な洗浄ステップの後、高品質のRNAが濃縮された形態で溶出されます。手順全体は20分未満で完了できます。注：このキットは、膵臓など高濃度のリボヌクレアーゼを持つ組織には推奨されません。

ほとんどの下流アプリケーションに適合
PARIS™の手順によって総分画、核分画、または細胞質分画から単離されたRNAは、ブロットハイブリダイゼーション、in vitro翻訳、cDNA合成、RT-PCRなど、さまざまな下流アプリケーションで使用できます。RT-PCR実験で使用するRNAには、DNase I処理が推奨されます（関連製品を参照）。タンパク質分画は、機能的アッセイ、免疫沈降、ウェスタンブロッティング、2次元のゲル電気泳動など、一般的なほとんどのアプリケーションに直接使用できます（図を参照）。

関連製品：
TURBO™ DNA-free™またはDNA-free™ DNase処理および除去試薬（それぞれSKU #AM1907およびAM1906）は、フェノール抽出やアルコール沈殿を行うことなく、トータルRNAおよび核RNAサンプルから微量のDNAを迅速に除去するのに最適です。細胞質RNA分画には、実質的にDNA汚染がありません。