Ambion™大腸菌リボヌクレアーゼ III（RNase III、EC 3.1.24）は、二本鎖DNA（dsRNA）に特異的なリボヌクレアーゼです。大腸菌では、RNase IIIはrRNAの成熟中にリボソームRNA（rRNA）プリカーサーを開裂します。この酵素は、2～3ヌクレオチド3'オーバーハング、5'リン酸塩、3'ヒドロキシル末端を持つ12–15 bp dsRNA断片にdsRNAを開裂します。したがって、RNase III開裂産物の末端およびオーバーハングは、真核RNAi経路においてDicerによって産生されたものと同じです。RNase III開裂産物のトランスフェクションは、哺乳類細胞中のRNAiの誘導に使用できます（特許出願中）。

ユニット定義：
1つのユニットは、37℃で60分で約12～30 bpの断片に1 µgの500 bpのdsRNA基質の開裂を触媒する酵素の量として定義されます。