mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA Transcription Kit

mMESSAGE mMACHINE™ T7 Ultraキットは、新しいキャップアナログであるAnti-Reverse Cap Analog（ARCA）と特許取得済みの高収量転写テクノロジーを組み合わせ、他の転写産物に比べて翻訳の際により高収量のタンパク質を産生するRNA転写産物を合成します。本キットには50回の反応分の試薬が含まれています。mMESSAGE mMACHINE™ T7 Ultraキットには以下の利点があります：

•in vitro転写されたRNAから効率良くタンパク質を合成します
• in vitroとin vivoのどちらでもRNA転写産物をより効率的に発現できます
• ポリ（A）末端用の付属試薬を使用して、in vivoで転写産物を安定化できます

ARCAキャップされたRNAで翻訳活性を向上
ARCAでの塩基修飾により、機能的で翻訳可能な方向のみで取り込みが発生します。従来のキャップアナログは、機能的および非機能的のどちらの方向でも取り込まれる場合があります。そのため、ARCAを転写反応に取り入れることで、100%翻訳可能なキャップされたRNAが得られます。これは、mMESSAGE mMACHINE™ T7 Ultra転写産物にポリ（A）末端を含めることでさらに強化されています。ARCAおよびARCA／ポリ（A）末端が付加された転写産物と、キャップアナログおよびキャップアナログ／ポリ（A）末端が付加された転写産物を比較した実験では、ARCAキャップされたRNAを使用したほうが、合成されるタンパク質濃度が高くなることが示されています。

ARCAとは
Anti-Reverse Cap Analog（ARCA）は修飾されたキャップアナログであり、3' OH基（m⁷Gに近い）がOCH₃に置換されています（概略図参照）。この置換により、RNAポリメラーゼは残りのヒドロキシル基からしか転写を開始できないため、ARCAは前方方向でのみ取り込まれます。その結果、5'末端にARCAを持つ合成された転写産物は100%翻訳可能であり、翻訳に対する強い促進効果をもたらします。

in vitro転写されたRNAの適切なキャップ付加
RNAの適切なキャップ付加により、タンパク質合成の適切な開始に加え、in vivoでのmRNAの安定性と処理が促進されます。キャップ構造を持たないRNAは、細胞へのマイクロインジェクションまたはトランスフェクションの際に、細胞注のRNaseによって急速に分解されてしまいます。また、キャップ構造を持つRNAは、in vitro翻訳系においても翻訳効率が向上するのが一般的であり、機能的な方向でのみ取り込まれたキャップアナログを持つRNAが生成されます。そのため、従来のキャップアナログの代わりにARCAを使用することで、100%翻訳可能なキャップRNAが合成されます。